[发明专利]基于ABCB1基因的小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的PCR检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)提取待测小菜蛾的RNA样品，并反转录为cDNA模板；

(2)将所述cDNA模板加入到检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的特异性PCR引物对的PCR反应液中得到PCR反应体系；所述检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的特异性PCR引物对的序列为：正向引物序列如SEQ ID NO. 2所示，反向引物序列如SEQ ID NO. 3所示；

(3)进行实时荧光定量PCR检测；同时采用内参基因RPL32特异性引物进行实时荧光定量PCR检测，所述内参基因RPL32特异性引物的正向引物序列为5′-CCAATTTACCGCCCTACC-3′；反向引物序列为5′-TACCCTGTTGTCAATACCTCT-3′；

其中，若所述待测小菜蛾的样品产生典型的“S”型扩增曲线及单峰融解曲线，且ΔCt值≥ 5，则说明所述小菜蛾待测样品对Bt杀虫蛋白Cry1Ac产生抗性；若ΔCt值≤ 4，则说明待测小菜蛾待测样品未对Bt杀虫蛋白Cry1Ac产生抗性，其中ΔCt值就是靶标基因ABCB1与内参基因之间的Ct值的差值。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR检测的扩增程序为：95 ℃预变性10 min，95 ℃变性15 sec，55 ℃退火30 sec，72 ℃延伸30 sec，40个循环。

3.如权利要求2所述的检测方法，其中，PCR过程完成后，按1.6 ℃•s^-1的升温速率从72℃升至95 ℃进行融解曲线的分析验证，具体过程为：95 ℃进行15 s，然后60 ℃进行1min，按0.15 ℃•s^-1的升温速率从60 ℃升至95 ℃，最后95 ℃进行1 s。

4.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于：所述待测小菜蛾的RNA样品为小菜蛾4龄幼虫中肠的RNA样品。