[发明专利]超高效合相色谱测定游离态和质子化尼古丁含量的方法

权利要求书

1.一种超高效合相色谱测定游离态和质子化尼古丁含量的方法，其特征在于，包括：

（1）尼古丁标准溶液的制备：称取尼古丁对照品，通过色谱甲醇超声溶解定容，再进行移液，用二氯甲烷定容，过滤、得到一系列不同浓度标准液；

（2）待测样品游离态尼古丁溶液的制备：

（a）准确称取电子烟油样品于10 mL容量瓶中，超纯水定容，转移至50 mL具塞离心管中；

（b）加入5-20 mL二氯甲烷于步骤（a）的具塞离心管中，上下摇晃，静置1-5 min，取二氯甲烷层于容量瓶中；

（c）重复步骤（b）1-3次，将每次得到的下层合并，二氯甲烷定容，过滤得到待测滤液Ⅰ；

（3）待测样品质子化尼古丁溶液的制备：向步骤（2）中萃取后的具塞离心管的水相中加入10-500 μL饱和氢氧化钠溶液，摇匀静置1-10 min，用二氯甲烷萃取两次，合并二氯甲烷下层，二氯甲烷定容，过滤得到待测滤液Ⅱ；

（4）精密吸取步骤（1）得到的标准溶液注入超高效合相色谱仪中进行检测即可；精密吸取步骤（2）和步骤（3）得到的待测滤液Ⅰ和待测滤液Ⅱ注入超高效合相色谱仪中进行检测即可；

其中，在步骤（2）中，所述样品为电子烟油或自制尼古丁盐；超高效合相色谱仪的检测参数条件具体为：色谱柱型号为ACQULITY UPC² Viridis BEH，3×100 mm，1.7 μm；流速：0.5-3 mL·min ^-1；检测波长：259nm；进样量：0.5-10 μL；色谱柱温：50℃；系统背压1500-2000 pis；等度洗脱2 -4min；流动相是90%CO₂，辅助溶剂为10%甲醇或10%乙醇。

2.根据权利要求1所述的超高效合相色谱测定游离态和质子化尼古丁含量的方法，其特征在于，标准工作液配置包括：

称取尼古丁对照品100mg于50ml容量瓶中，色谱甲醇超声溶解定容，得到浓度为 2000mg·L^-1 标准母液；

将标准母液用移液管分别准确移取 0.1 mL、0.2mL、0.5 mL、0.8 mL、1 mL 至 10 mL容量瓶中，二氯甲烷定容，过滤得到 20 mg·L^-1、40 mg·L^-1 、100 mg·L^-1 、160 mg·L^-1 、200 mg·L^-1 一系列不同浓度标准液。

3.根据权利要求1所述的超高效合相色谱测定游离态和质子化尼古丁含量的方法，其特征在于，在步骤（2）中，待测样品游离态尼古丁溶液的制备包括：

（a）准确称取电子烟油样品于10 mL容量瓶中，超纯水定容，转移至50 mL具塞离心管中；

（b）加入10 mL二氯甲烷于步骤（a）的具塞离心管中，上下摇晃，静置1-5 min，取二氯甲烷层于容量瓶中；

（c）重复步骤（b），将两次得到的下层合并，二氯甲烷定容，过滤得到待测滤液Ⅰ。

4.根据权利要求1所述的超高效合相色谱测定游离态和质子化尼古丁含量的方法，其特征在于，在步骤（3）中，待测样品质子化尼古丁溶液的制备包括：向步骤（2）中萃取后的具塞离心管水相中加入500 μL饱和氢氧化钠溶液，摇匀静置1-10 min，用二氯甲烷萃取两次，合并下层，二氯甲烷定容，过滤得到待测滤液Ⅱ。

5.根据权利要求1所述的超高效合相色谱测定游离态和质子化尼古丁含量的方法，其特征在于，在步骤（3）中所述超高效合相色谱进行检测的参数条件具体为：流速：2.5 mL·min ^-1 ；进样量：2 μL；系统背压 2000pis；等度洗脱 2 min：流动相是90%CO₂,辅助溶液为10%甲醇。

6.根据权利要求1所述的超高效合相色谱测定游离态和质子化尼古丁含量的方法，其特征在于，在步骤（1）-步骤（3）中，过滤的条件为：经 0.22 µm 微孔滤膜过滤。