[发明专利]一种注射用黄芪多糖分子量的检测方法

说明书

本发明涉及一种注射用黄芪多糖分子量分布的检测方法，所述方法采用分子排阻色谱法和高效液相色谱法联用的方法，其中分子排阻色谱法的色谱条件为：Shodex Asahipak GS‑2G 7B(保护柱)与GS‑620HQ色谱柱串联，以0.5‑1％无水硫酸钠水溶液为流动相，流速为每分钟0.5‑1ml，柱温为35‑45℃，采用示差折光检测器检测。

技术领域：

本发明涉及一种药物检测方法，特别涉及一种中药制剂注射用黄芪多糖分子量的检测方法。

背景技术：

注射用黄芪多糖是一种益气补虚。用于倦怠乏力，少气懒言，自汗，气短，食欲不振属气虚证因化疗后白细胞减少，生活质量降低，免疫功能低下的肿瘤患者的药物。其中药成分为黄芪多糖，黄芪多糖是从中药黄芪中提取、分离，纯化所得有效部位。

临床前实验表明：黄芪多糖具有刺激骨髓造血和增强免疫功能的作用。

免疫方面：

1、体外实验表明：黄芪多糖能够刺激小鼠脾脏细胞的增殖和人外周血单核细胞分泌多种细胞因子。

2、体内实验表明：黄芪多糖可增强正常小鼠，受免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能：促进血清溶血素形成：提高空斑形成细胞的溶血能力及碳粒廓清作用：增强DNFB诱发的小鼠迟发型变态反应；增强小鼠Nl细胞的活性和IL-2 的产生。

造血方面：

体外实验表明。黄芪多糖可促进小鼠骨髓基质细胞的增殖；促进小5-骨髓中性粒细胞和骨髓巨核细胞的增殖和成熟：对受5-氟尿嘧啶或丝裂霉素C化疗或X 光辐射的小鼠。黄芪多糖可促进其骨髓造血祖细胞或脾脏前体细胞的增殖与成熟，并促进其外周血白细胞、红细胞和血小板的回升。

黄芪多糖分子量分布很广，即使采用相同的黄芪原料，提取或分离过程中的差异都可能造成产物的不同，目前已分离纯化出十几种黄芪多糖。而不同分子量的多糖对疗效会有影响，为了保证注射用黄芪多糖的治疗，对其分子量分布的检测成为重要的质量控制指标，但目前注射用黄芪多糖的质量标准中无分子量分布的检测项目，因此研究一种能用于注射用黄芪多糖分子量分布的检验方法尤其中药。

现有黄芪多糖分子量分布的检测，见于以下公开出版物中

《太原工业大学学报》1994年04期，应用150－C ALC/GPC色谱仪测试黄芪多糖的分子量及其分布，杨金兰，武正簧，【摘要】：本文应用美国Wat ers公司产大型精密仪器150－CALC/GPC(简称150－C)色谱仪测定了黄芪多糖的分子量及其分布。通过解析谱图为从黄芪中分离、集取不同分子量级分的黄芪多糖工艺的研究提供了大量、可靠的分析数据。同时，提供了一种测定天然大分子有机物特征常数的方法。

《食品科学》2004年08期黄芪多糖的分子量分布，闫巧娟，韩鲁佳，江正强，皇才进，【摘要】：本文通过分级醇沉、分步醇沉和超滤方法研究黄芪多糖的分子量分布。结果表明:分级醇沉浓度对应的得率随醇浓度的升高而呈增加趋势；糖的含量变化起伏较大,醇浓度为60％时所得多糖含量比较低,醇浓度为30％和 70％时所得多糖含量较高；分步醇沉的醇浓度为10％时沉淀下来的多糖所占比例最大,醇浓度达到80％时大部分多糖都可以沉淀下来；而所得多糖含量除90％醇浓度时较低外,其余相差不大；超滤后黄芪多糖大部分分布在离心沉淀和截留分子量 150千道尔顿(150kDa)以上部分,两者占了57.6％；其含量除3kDa以下和6kDa至 50kDa部分较低外,其它部分含量相差不大。黄芪多糖的分布很不均匀,大分子量和小分子量的多糖较多,而3kDa至150kDa这一段的多糖只占总多糖的13.2％。

《宁夏医学院学报》2006年第2期韩凤兰，胡建英，高效液相色谱法测定宁夏黄芪多糖的分子量及其分布，摘要：在进行注射用黄芪多糖标准提升时，通过研究确认建立了注射用黄芪多糖分子量分布的检测方法，可以精确定位黄芪多糖在制备工艺中经分离纯化得到的具有特定重均分子量范围和分布的多糖有效部位，从而更为精准的限定和控制此产品的质量，扩大药品的适应症。