[发明专利]兔抗人TRK蛋白单克隆抗体制备及其免疫组化用途

说明书

本发明公开了一种兔抗人TRK蛋白的单克隆抗体，能够特异性地识别细胞表达的TRK和/或TRK融合蛋白，表现稳定且效价高，与细胞内其它蛋白无交叉反应，具有一定的医学基础研究价值。本发明还涉及上述单克隆抗体在制备用于检测TRK和/或TRK融合蛋白的免疫组化检测工具中的应用。本发明采用免疫组织化学的方法检测肿瘤细胞TRK和/或TRK蛋白，主要包括肺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、胃肠癌、结肠癌、软组织肉瘤、唾液腺、婴儿纤维肉瘤、阑尾癌、乳腺癌、胆管癌、胰腺癌等，为能否使用TRK激酶抑制剂进行治疗提供有力的科学参考，有效降低治疗费用，具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种兔抗人TRK蛋白的单克隆抗体，以及该抗体的免疫组化用途。

背景技术

原肌球蛋白相关激酶(Tropomyosin-related kinase，TRK)是一类神经生长因子受体，参与调节细胞通讯和肿瘤生长，而NTRK是编码TRK的基因。基因NTRK包含NTRK1、NTRK2和NTRK3，分别负责编码TRK家族蛋白TRKA、TRKB和TRKC的合成。TRK家族蛋白都有一个同源保守的结构区域，该结构区域包括5个细胞外结构域、1个跨膜结构域和1个细胞内的激酶结构域。在胞外5个结构域中，结构域1和3为半胱氨酸富集区，结构域2为亮氨酸富集区，结构域4和5都是类似免疫球蛋白的结构，其中结构域5为配体特异性识别的位点。随着研究的深入，越来越多的证据表明TRK激酶与肿瘤发生发展密切相关。TRK可作为原癌基因在肿瘤的恶性转化、转移及存活信号中发挥重要作用。TRK激酶的异常活化机制与多数酪氨酸激酶类似，二聚化导致TRK激酶自磷酸化，被激活后活性显著上升，从而激活下游PI3K/AKT、STAT3、RAS/MAPK/ERK和PLC-γ等信号级联通路。TRK激酶信号通路的改变，包括基因融合、蛋白过度表达或单核苷酸改变，已经被发现是许多肿瘤的致病原因，特别是NTRK基因的融合，常直接导致TRK系列蛋白高度表达，为目前最明确的致癌原因。因此，研制出一种特异性高、表现稳定的TRK抗体，用于检测肿瘤细胞NTRK和/或NTRK融合基因的表达，对于后续能否使用TRK基因抑制剂进行治疗具有重要意义。

最近，美国FDA批准药物Vitrakvi上市，Vitrakvi用于治疗携带NTRK基因融合的成人和儿童，局部晚期或转移性实体瘤患者，成为第一个正式批准上市的口服TRK激酶抑制药物，同时也是第一个与肿瘤类型无关的“广谱”抗癌药(该药物尚未被批准在国内上市，需一段审批时间)。而由于该基因抑制药物刚刚上市，国内目前尚没有自主研发的TRK抗体，国际范围内商业化的TRK抗体也很稀少，并且目前也仅应用于基础研究领域，特异性和亲和力方面均有待提高，因此亟待研发新的性能优异的抗TRK单克隆抗体，填补国内本行业的空白，降低治疗费用，减轻病人负担。本发明成功研制出一种特异性高、表现稳定且效价高的兔源TRK蛋白的单克隆抗体，可用于检测肿瘤细胞NTRK和/或NTRK融合基因的表达水平(可识别TRKA、TRKB和TRKC三种亚型)，具有一定的医学基础研究价值。本发明采用免疫组织化学方法(IHC)检测肿瘤细胞TRK和/或TRK融合蛋白，主要包括肺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、胃肠癌、结肠癌、软组织肉瘤、唾液腺、婴儿纤维肉瘤、阑尾癌、乳腺癌、胆管癌、胰腺癌等，为判断能否使用TRK激酶抑制剂进行治疗提供有力的科学参考，有效降低治疗费用，具有重要的应用价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题为提供一种特异性好、表现稳定且效价高的抗TRK蛋白的单克隆抗体，及该抗体在制备用于检测TRK和/或TRK融合蛋白的免疫组织化学检测工具中的应用。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种特异性结合人TRK和/或TRK融合蛋白的单克隆抗体。

本发明所述单克隆抗体的制备方法如下：