[发明专利]铂-纳米花及其制备方法和应用

权利要求书

1.采用铂-纳米花传感器体系检测牛奶样品中大肠杆菌O157:H7的方法，其特征在于，所述铂-纳米花传感器体系包括：修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体、链霉亲和素SA标记的磁珠、铂-纳米花、硼烷氨；所述铂-纳米花，其组成成分为：纳米铂、抗菌肽、CuSO₄和磷酸盐缓冲液PBS；

包括以下步骤：

步骤一、制备修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体；

步骤二、将修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体固定在标记链霉亲和素SA的磁珠上；

步骤三、加入牛奶样品，37℃恒温孵育2h进行磁性分离，用0.1～0.5mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次后吸干；

步骤四、加入铂-纳米花，在大肠杆菌O157:H7存在时，磁珠上的靶标抗体与铂-纳米花之间形成三明治夹心免疫复合物；

步骤五、加入3～5M氢氧化钠，释放铂-纳米花中的纳米铂；

步骤六、加入产气底物硼烷氨，激发硼烷氨分解并产生氢气，采用氢气探测仪读取气体浓度，利用气体浓度进行计算实现牛奶样品中大肠杆菌O157:H7浓度的测定，通过氢气探测仪作为信号输出平台对牛奶样品中大肠杆菌O157:H7进行检测，利用氢气探测仪氢气浓度读数对牛奶样品中大肠杆菌O157:H7进行定量及定性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述铂-纳米花的制备方法，包括以下步骤：

取1.5mL离心管，依次加入10～100μL、0.5mg/mL纳米铂、0.01～0.1/mL抗菌肽悬浮于800～1500μL、10mM的磷酸盐缓冲液PBS中，所述磷酸盐缓冲液PBS中含有20μL、120mM的CuSO₄，经震荡混匀、常温静置孵育12～24h后，10000rpm离心3～5min，弃上清后加入100μL、0.1mM的磷酸盐缓冲液PBS悬浮，4℃保存备用。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二的具体过程为：

将1～10μL标记链霉亲和素SA的磁珠原液置于离心管中，用0.1～0.5mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次后，加入5～15μL、0.1mg/ml的修饰生物素Biotin的靶标病原菌抗体，37℃孵育1～2h，然后用0.1～0.5mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次，置于磷酸盐缓冲液PBS中混合均匀，得到终产物，4℃保存备用。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤四的具体过程为：

加入3～10μL铂-纳米花，37℃恒温孵育1h进行磁性分离，用0.1mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次，使其悬浮于10μL磷酸盐缓冲液PBS中，得到三明治夹心免疫复合物。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述链霉亲和素SA标记的磁珠粒径为2.8μm，浓度为10mg/mL。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液PBS的pH为7.4，其组成成分为：0.1mM Na₂HPO₄和0.1mM NaH₂PO₄。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤六中，加入硼烷氨的体积为1mL，浓度为20～50mM，反应时间为1～5min。