[发明专利]一种用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒及其使用方法和应用

权利要求书

1.一种用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：检测GCH1基因的rs72713460位点的探针对及引物对；检测KCNJ15基因的rs928771位点的探针对及引物对；检测SORL1基因的rs3824968位点的探针对及引物对；2X PCR扩增液。

2.根据权利要求1所述的用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒，其特征在于，所述检测GCH1基因的rs72713460位点的探针对为：将如SEQ NO:1所示的探针A和如SEQ NO:2所示的探针B等比例进行混合得到；所述检测GCH1基因的rs72713460位点的引物对为P1和P2；所述P1、P2的序列分别如SEQ NO:3和SEQ NO:4所示。

3.根据权利要求2所述的用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒，其特征在于，所述探针A的5’端进行FAM标记，3’端进行TAMRA标记；所述探针B的5’端进行VIC标记，3’端进行TAMRA标记。

4.根据权利要求1所述的用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒，其特征在于，所述检测KCNJ15基因的rs928771位点的探针对为：将如SEQ NO:5所示的探针C和如SEQ NO:6所示的探针D等比例进行混合得到；所述检测KCNJ15基因的rs928771位点的引物对为P3和P4；所述P3、P4的序列分别如SEQ NO:7和SEQ NO:8所示。

5.根据权利要求4所述的用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒，其特征在于，所述探针C的5’端进行FAM标记，3’端进行TAMRA标记；所述探针D的5’端进行VIC标记，3’端进行TAMRA标记。

6.根据权利要求1所述的用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒，其特征在于，所述检测SORL1基因的rs3824968位点的探针对为：将如SEQ NO:9所示的探针E和如SEQ NO:10所示的探针F等比例进行混合得到；所述检测SORL1基因的rs3824968位点的引物对为P5和P6；所述P5、P6的序列分别如SEQ NO:11和SEQ NO:12所示。

7.根据权利要求6所述的用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒，其特征在于，所述探针E的5’端进行FAM标记，3’端进行TAMRA标记；所述探针F的5’端进行VIC标记，3’端进行TAMRA标记。

8.根据权利要求1所述的用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒，其特征在于，所述2XPCR扩增液的组分为：50mM pH为8.8的Tris-HCl，20mM(NH₄)₂SO₄，2.5mM MgSO₄，200μM dNTP，0.05％-0.5％BSA，0.01-0.05％明胶，0.1％-0.5％聚乙二醇辛基苯基醚，0.1-0.5M海藻糖，0.2-2M丙二醇，5％甘油。

9.根据权利要求1-8任意一项所述的用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：

(1)血液采集：采集新鲜的血液，向血液中加入肝素至终浓度为10U/ml；

(2)血液处理：在进行PCR扩增时，取适量血液使用0.9％的NaCl溶液，按照1:8的比例将血液进行9倍的稀释后待用；

(3)荧光定量PCR扩增：取2X PCR扩增液，向其中加入处理后的全血，分别加入一种探针对以及与之对应的引物对，其余补水，进行上机反应；

(4)结果分析：根据荧光定量PCR结果来判断老年痴呆痴呆风险基因是否发生突变。

10.根据权利要求1-8任意一项所述的用于老年痴呆风险基因检测的试剂盒在检测老年痴呆风险基因位点中的应用。