[发明专利]一种昆虫病原线虫的快速清洗方法

说明书

本发明提供一种昆虫病原线虫的快速清洗方法。该方法包括步骤：将昆虫病原线虫固体培养方法得到的培养混合物放入到洗衣机的洗衣桶中，通过设置洗衣机洗衣程序，依次进行单次洗涤‑脱水‑漂洗‑脱水或单次洗涤‑脱水‑漂洗‑脱水‑漂洗‑脱水，并收集洗衣机排出液；将得到的排出液静置沉淀，弃上清；然后沉淀物用蒸馏水搅拌清洗，得到昆虫病原线虫浓缩液；最后加入苯并异噻唑啉‑3‑酮，用海绵吸附，密封包装后低温保存。本发明方法简单，所用器具易得，能够有效提高线虫的回收效率，缩短回收时间，对线虫损伤小，提高线虫的质量和品质，所得线虫成活率高、侵染力强。

技术领域

本发明涉及一种昆虫病原线虫的快速清洗方法，属于生物繁殖培养技术领域。

背景技术

昆虫病原线虫是在自然界寄生于昆虫体内的线虫，包括斯氏线虫科[Steinernematidae carpocapsae(Sc-2)]和异小杆线虫科[Herorhabditidaebacteriophora(Hb-1)]；这类线虫以第三龄感染期虫态(infective juvenile，IJ)从昆虫的气孔、口部、肛门或节间膜进入虫体内，随后释放出自身携带的Xenorhabdus属(与斯氏线虫共生)或Photorhabdus属(与异小杆线虫共生)共生细菌，线虫及共生细菌繁殖并释放有毒物质导致昆虫死亡。昆虫病原线虫能有效防治农林、园艺植物的土栖和钻蛀性害虫，如韭蛆、蛴螬、桃小食心虫、黄曲跳甲等，具有寄主广泛，致病力强，并且对人畜无害的特点，是一种新型的生物杀虫剂。

昆虫病原线虫培养方式主要分为活体培养和离体培养两种；其中，离体培养又根据培养基质状态的不同，分为固体培养和液体培养。固体培养方法对技术的难度和培养条件的要求明显低于液体培养，固体培养方法生产的线虫致病力、活力也要优于液体培养方法，因此，固体培养方法特别适合新入行业的公司，或已成熟的公司在市场需求量大时快速扩大规模；进而，昆虫病原线虫的固体培养方法具有很好的发展前景。

现有固体培养方法主要经过共生菌的分离制备、线虫繁殖、收获、清洗及存储等过程，清洗是其中重要的步骤，目的是尽可能多地、完好地将线虫从固体培养物中快速分离下来，以获得纯度高、浸染力和成活率好的昆虫病原线虫产品。现有的昆虫病原线虫的清洗方法多采用静置浸泡的方法，线虫的提取时间较长，提取率仅为80-90％，有待进一步提高。如中国专利文献CN106172259A公开了一种昆虫病原线虫清洗方法，步骤包括：(a)将线虫连同固体培养物浸泡在装有清水的较大容器中，容器中设有活动筛网，容器中带有通气震荡装置；(b)静置分离，让线虫通过筛网，留下海绵等杂质，95％左右的感染期线虫从培养物中爬出；(c)产业化生产中将除去杂质的线虫原液按10:1的比例加入硅藻土粉，通过压滤机进行固液分离，压滤机压力设置小于3公斤，所得含线虫的硅藻土粉进行计数分包存储。上述发明针对的是昆虫病原线虫固体培养方法的线虫收获清洗储存问题，该方法能够达到较好的收获效果，对线虫的损伤小，后期制成的线虫产品中线虫成活率高。但该发明中昆虫病原线虫清洗方法采用静置浸泡的方法，线虫的提取时间较长，提取率也有待提高，且并未涉及昆虫病原线虫的浸染力和成活率等相关数据。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供一种昆虫病原线虫的快速清洗方法，针对的是昆虫病原线虫固体培养完成后线虫快速清洗收获储存问题。本发明方法简单，所用器具易得，能够有效提高线虫的回收效率，缩短回收时间，对线虫损伤小，提高线虫的质量和品质，所得线虫成活率高、侵染力强。

本发明的技术方案如下：

一种昆虫病原线虫的快速清洗方法，包括步骤：

(1)清洗：将昆虫病原线虫固体培养方法得到的培养混合物放入到洗衣机的洗衣桶中，通过设置洗衣机洗衣程序，依次进行单次洗涤-脱水-漂洗-脱水或单次洗涤-脱水-漂洗-脱水-漂洗-脱水，同时收集洗衣机排出液；

(2)浓缩分离：将步骤(1)得到的排出液静置沉淀，弃上清；然后沉淀物用蒸馏水搅拌清洗，得到昆虫病原线虫浓缩液；