[发明专利]表达CXCR2的CAR-NK92细胞、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种工程化的免疫细胞，其特征在于，所述工程化的免疫细胞表达靶向CD47的嵌合抗原受体CAR和CXCR2的融合蛋白；

其中，所述融合蛋白的结构如下式II所示：

L-S-H-TM-C-CD3ζ-A-Q   (II)

式中，所述“-”为连接肽或肽键；

L为信号肽序列；

S为靶向CD47的抗原结合结构域，所述靶向CD47的抗原结合结构域为突变的SIRPα的胞外结合区；并且，所述L-S的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2中第1-148位所示；

H为铰链区，所述H为CD8，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 2中第149-195位所示；

TM为跨膜结构域，所述TM为NKG2D，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 2中第196-217位所示；

C为共刺激信号分子，所述C为4-1BB，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 2中第218-259位所示；

CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；

A为连接肽；

Q为CXCR2；

并且所述免疫细胞为NK细胞。

2.如权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞为NK92细胞。

3.如权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体CAR定位于所述免疫细胞的细胞膜。

4.如权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述L的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2中第1-30位所示。

5.如权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述S的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2中第31-148位所示。

6. 如权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述CAR的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2中第1-371位所示。

7.如权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述CXCR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2中第390-748位所示。

8.如权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述CAR的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1中第1-1113位所示。

9.如权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述CXCR2的核苷酸序列如SEQ ID NO:1中第1168-2247位所示。

10. 一种制备权利要求1所述的工程化的免疫细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(A) 提供一待改造的免疫细胞，所述免疫细胞为NK细胞；和

(B) 对所述的免疫细胞进行改造，从而使得所述的免疫细胞表达靶向CD47的嵌合抗原受体CAR和CXCR2的融合蛋白，从而获得权利要求1所述的工程化的免疫细胞。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，在步骤(A)中，还包括分离和/或激活待改造的免疫细胞。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括对获得的工程化免疫细胞进行功能和有效性检测的步骤。

13.一种制剂，其特征在于，所述制剂含有权利要求1-9任一项所述的工程化的免疫细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

14.如权利要求13所述的制剂，其特征在于，所述制剂中所述工程化的免疫细胞的浓度为1×10³-1×10⁸个细胞/ml。

15.如权利要求1所述的工程化的免疫细胞的用途，其特征在于，用于制备预防和/或治疗白血病的药物。