[发明专利]一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测酿酒原料中16种生物毒素的方法

说明书

本发明公开了一种超高效液相色谱‑三重四极杆串联质谱仪同时检测酿酒原料中16种生物毒素的方法，是将样品经过混合溶液(乙腈：水：乙酸＝29:70:1)超声萃取10min，离心，通过HLB萃取小柱进行净化除杂和富集，富集后使用甲醇复溶即完成测试样的制备，经超高效液相色谱仪分离后，采用三重四级杆串联质谱仪进行多反应离子监测模式检测。本发明16种生物毒素在50～1000ng/mL范围内线性关系好，相关系数r²均大于0.993，样品的平均回收率在90～120％，检出限在2.69～5.16ng/mL，本发明方法准确可靠、简单快捷，可用于同时检测酿酒原料中16种生物毒素。

技术领域

本发明涉及一种酿酒原料中生物毒素的检测方法，具体地说是一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测酿酒原料中16种生物毒素的方法，属于粮食类分析技术领域。

背景技术

酿酒原料主要有小麦、玉米、高粮，大米以及糯米，由于含有丰富的营养物质，在田间和储存过程中常受到多种真菌的污染而产生真菌毒素。例如镰刀菌产生脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)和伏马毒素(Fumonisins，FBs)，黄曲霉产生黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)。欧盟已制定了玉米中DON、ZEN、AFs、FBs、赭曲霉毒素(OTA)、T-2和HT-2等真菌毒素的法规限量和推荐限量，我国食品安全国家标准规定玉米原粮中DON限量为1000μg/kg，ZEN限量为60μg/kg，黄曲霉毒素B1(AFB1)限量为20μg/kg，OTA限量为5μg/kg。

酿酒原料中真菌毒素的检测方法主要有酶联免疫法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等。其中，酶联免疫法作为快速筛查方法被广泛使用，具有前处理简单、可批量检测样品的优点，但每次只能检测一种真菌毒素，且易受油脂基质干扰，出现假阳性。高效液相色谱法具有准确度高、稳定性好等优点，是目前最为普遍使用的方法之一。但其前处理步骤较为复杂，一般只能检测一类或一种真菌毒素，处理通量有限；同时，定性方法通常需要衍生。

发明内容

本发明针对上述现有技术所存在的问题，旨在提供一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测酿酒原料中16种生物毒素的方法。本发明方法简单、快速、通量高、成本低，适用于大批量粮食和酒类产品中多种生物毒素的快速、准确定量检测，为粮食和酒类产品中真菌毒素的检测和污染风险评估工作提供技术保障。

本发明所用仪器为超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪UPLC-MS/MS，包括超高效液相色谱仪UPLC和三重四极杆串联质谱仪MS/MS；

本发明超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测酿酒原料中16种生物毒素的方法，包括如下步骤：

步骤1：各生物毒素保留时间和监测离子的确定

分别取黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1、脱氧血腐镰刀菌烯醇、3-乙酰基脱氧血腐镰刀菌烯醇、15-乙酰基脱氧血腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、T-2毒素、HT-2毒素、杂色曲霉毒素、伏马毒素B1、伏马毒素B2、伏马毒素B3配制浓度为300ng/mL的单标工作溶液，将各单标工作溶液通过三重四极杆串联质谱仪进行母离子的扫描，确定各生物毒素的监测离子和定量离子对，然后将各单标工作溶液进行UPLC-MS/MS检测，确定各生物毒素的保留时间；

步骤2：16种生物毒素标准曲线的绘制