[发明专利]一种水果过敏原的提取鉴定及组分诊断方法

说明书

本发明公开了一种水果过敏原的提取鉴定及组分诊断方法，包括以下加工步骤，S1，首先对水果蛋白进行总量提取；S2，步骤S1中的水果总蛋白含量进行测定；S3，鉴定水果蛋白不同组分；S4，鉴定水果蛋白致敏组分；S5，结果分析。本研究利用蛋白提取法、Bradford蛋白检测法、SDS‑PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)、Western‑Blot等方法，发明了一种水果过敏原提取鉴定及组分检测的实验室诊断方法，能够用于桃、樱桃、猕猴桃、石榴等不同种类水果过敏患者的体外诊断，而且能够细化至组分检测，为临床上诊断食物过敏、以及明确过敏原组分提供了新的方法，并为今后研发我国特有的水果过敏原组分检测芯片积累经验。

技术领域

本发明涉及水果过敏原的提取鉴定技术领域，尤其是一种水果过敏原的 提取鉴定及组分诊断方法。

背景技术

食物过敏等过敏性疾病在全球的发病率日益增高，影响了全世界近四分 之一的人口。过敏原是指食物中能够引起机体免疫系统异常反应的成分，是 诱发过敏的重要因素。世界粮农组织(FAO，1995)发布了八大类食物过敏 原，分别为：蛋品、花生、牛奶、黄豆、小麦、坚果、鱼类和甲壳类食品。 而水果也是中国人群一类常见的过敏原，如桃、芒果、猕猴桃等。当某种水 果(如桃)过敏患者进食该水果后，可出现接触部位如唇、舌和咽等部位黏膜肿胀、瘙痒，即口腔黏膜变态反应综合征(oral allergy syndrom,OAS)，甚 至更严重的全身反应(systemic reaction，SR)而危及生命。有些患者甚至存 在多种食物交叉过敏，或者花粉过敏原与食物的交叉过敏，严重影响了患者 的健康与日常生活。因此，过敏原的检测对于诊断食物过敏，指导患者的饮 食习惯，避免发生严重过敏反应，有着重要意义。尤其是对过敏原细化到分 子水平，进行组分检测，更加有助于医生评估过敏反应风险，为针对性的治 疗提供指导。

但是，目前食物过敏原组分检测在我国的使用具有较大的局限性。首先， 过敏原组分检测的主要方法为荧光酶联免疫测定法(ImmunoCAP法)，是定 量检测样本中微量sIgE的方法，使用的检测仪器UniCAP以及试剂均由国外 研发，价格昂贵。其次，ImmunoCAP法能够检测的过敏原中，只有少数种类 被我国药监局批准，包括：蛋白、牛奶、小麦、花生、大豆、芝麻、蟹、虾。 对于这些种类之外的过敏原(如水果过敏原)无法在临床工作中进行规范的检测。第三，目前水果过敏原检测的方法除了上述ImmunoCAP法进行体外检 测外，理论上还可以使用皮肤点刺试验进行体内检测，由于国内目前尚无正 式批准使用的水果类皮肤点刺液，因此临床上不能开展水果过敏原皮肤点刺 试验；且该方法为有创操作，有诱发患者严重过敏反应的风险，对患者健康 有潜在的危险。第四，使用皮肤点刺的体内检测方法诊断水果过敏，仅能判 断患者对水果总蛋白是否有过敏反应，不能精细化诊断总蛋白中的致敏组分。 第五，水果过敏原中致敏蛋白含量较少，提取和鉴定均存在一定困难，给进 一步的组分诊断增加了难度，针对以上，在这里我们提出一种水果过敏原的 提取鉴定及组分诊断方法。

发明内容

本发明针对背景技术中的不足，提供了一种水果过敏原的提取鉴定及组 分诊断方法。

本发明为解决上述技术不足，采用改进的技术方案，一种水果过敏原的 提取鉴定及组分诊断方法，包括以下加工步骤，S1，首先对水果蛋白进行总 量提取；

S2，步骤S1中的水果总蛋白含量进行测定；

S3，鉴定水果蛋白不同组分；

S4，鉴定水果蛋白致敏组分；

S5，结果分析。