[发明专利]植物作为宿主在表达HIV中和抗体中的应用

权利要求书

1.植物作为宿主在表达HIV中和抗体中的应用；所述植物选自生菜、菠菜、番茄、萝卜、白菜、玉米、大豆、小麦或烟草；所述植物的器官选自种子、叶、根茎或整株植物。

2.一种表达载体，其特征在于，包括HIV中和抗体的重链序列或轻链序列以及载体。

3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述HIV中和抗体的重链序列或轻链序列为将HIV中和抗体的重链、HIV中和抗体的轻链的密码子优化为植物偏好的密码子，获得的优化HIV中和抗体的重链序列或优化的HIV中和抗体轻链序列。

4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述优化的HIV中和抗体的重链序列如SEQ ID No.2所示；所述优化的HIV中和抗体的重链的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述优化的HIV中和抗体的轻链序列如SEQ ID No.4所示；所述优化的HIV中和抗体的轻链的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

5.根据权利要求2至4任一项所述的表达载体，其特征在于，所述载体为双元植物载体。

6.根据权利要求2至5任一项所述的表达载体，其特征在于，其构建方法包括如下步骤：

步骤1：分别将HIV中和抗体重链、HIV中和抗体轻链的密码子优化为植物偏好的密码子，获得：

ⅰ.优化的HIV中和抗体的重链序列；

ⅱ.优化的HIV中和抗体的轻链序列；

步骤2：在所述优化的HIV中和抗体的重链序列的5’末端分别加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端分别加入Sac I位点；

在所述优化的HIV中和抗体的轻链序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端加入Sac I位点；

克隆到pUC57载体中，分别获得pIbali-H，pIbali-L克隆载体；

步骤3：通过Xbal/Sacl分别从步骤2所得的克隆载体中获得基因片段，克隆至双元植物载体pCam35S，分别获得表达载体p35S-Ibali-H，p35S-Ibali-L。

7.根据权利要求2至6任一项所述的表达载体在表达HIV中和抗体中的应用。

8.一种植物作为宿主表达HIV中和抗体的方法，其特征在于，将如权利要求2至6任一项所述的表达载体转化到农杆菌中，通过农杆菌介导真空渗透入植物组织后，提取、分离蛋白质，获得HIV中和抗体。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述农杆菌介导真空渗透包括如下步骤：

步骤1：抽真空25～45s；

步骤2：保持真空(-95kPa)压力30～60s；

步骤3：释放压力使得渗透液渗入所述植物组织；

重复上述步骤2～3次，避光处理4d。