[发明专利]miRNA-6761-5p及其新用途

说明书

本发明涉及miRNA‑6761‑5p及其新用途，具体涉及miR‑6761‑5p及其在制备区别左半结肠癌和右半结肠癌诊断制剂中的应用。左、右半结肠胚胎起源不同，两者在生理功能、形态及代谢等方面存在差异，导致肿瘤在发病机制上存在很大差异。本申请利用高通量数据分析发现miR‑6761‑5p在左半结肠癌中差异表达显著，进而利用荧光定量PCR实验进行验证分析，结果显示miR‑6761‑5p很有可能成为区别左右半结肠癌分子标志物，为临床应用奠定基础。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，更具体的涉及miR-6761-5p及其在制备区别左半结肠癌和右半结肠癌诊断制剂中的应用。

背景技术

结肠分为右半结肠和左半结肠，二者以脾曲为界，前者包括回盲部、升结肠、结肠肝曲、横结肠；后者由结肠脾曲、降结肠、乙状结肠组成。NCCN指南2017版明确医学界对左右半结肠癌的主流观点，即左、右半结肠胚胎起源不同，两者在生理功能、形态及代谢等方面存在差异，导致肿瘤在发病机制、病理特点、临床特征、转移规律、对治疗的反应以预后等方面不同。因此，针对左、右半结肠癌的临床及病理特征等方面的比较分析是很有必要的，尤其是能够区分二者的分子标志物，对指导临床不同发病部位的结肠癌的防治将起到重要作用。

microRNAs(miRNA)是一类短小(长度约为22个核苷酸)的非编码RNA分子，通过破坏mRNA的稳定结构或通过抑制翻译调节基因的表达而发挥作用。已有研究表明miRNA在结肠癌的发生发展中起到非常重要的作用：血清中miR-720、miR-484可用于结肠癌分期及早期诊断；miR-93可能通过PI3K/Akt信号通路参与结肠癌发生发展的过程；专利ZL2014101918129、CN2016106181508、CN201610620059X均揭示miRNA和结肠癌的相关性，但是，目前少有研究聚焦在miRNA和左右半结肠癌的相关性。

本研究中，申请人通过整合TCGA数据库中高通量测序数据，并运用生物信息学方法进行分析，发现能够区别左半结肠癌和右半结肠癌潜在靶点miR-6761-5p，现有研究报道过miR-6761-5p与黑色素瘤相关，但是没有研究表明其与消化道肿瘤的关系。申请人通过荧光定量PCR实验结果进行了验证，表明miR-6761-5p在左半结肠癌中表达显著。本发明为临床发现潜在的区别左右半结肠癌分子标志物奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供miR-6761-5p和/或其前体在制备结肠癌诊断试剂中的应用。

所述miR-6761-5p序列见序列表SEQ ID NO 1，其前体mir-6761序列见序列表SEQID NO 2。

进一步，结肠癌为左半结肠癌或右半结肠癌。miR-6761-5p和/或其前体在左半结肠癌中高表达。

优选的，结肠癌为左半结肠腺癌或右半结肠腺癌。

右半结肠癌包括发生在回盲部、升结肠、结肠肝曲、横结肠的癌变；左半结肠癌包括发展在结肠脾曲、降结肠、乙状结肠的癌变。

进一步，结肠癌诊断试剂采用高通量测序方法和/或定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测样本中miRNA和/或其前体的转录。

优选采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测样本中miRNA和/或其前体的转录。

优选的，所述的用于定量PCR方法包括特异性扩增miRNA和/或其前体的引物；所述的基于探针杂交方法包括与miRNA和/或其前体的核酸序列杂交的探针。

进一步，扩增miR-6761-5p的引物为序列SEQ ID NO 3。

本发明的目的在于提供一种结肠癌诊断试剂，所述结肠癌诊断试剂检测样本中miR-6761-5p和/或其前体的转录情况。