[发明专利]一种β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒和检测方法有效
| 申请号： | 201910130990.3 | 申请日： | 2019-02-20 |
| 公开（公告）号： | CN111593089B | 公开（公告）日： | 2023-10-20 |
| 发明（设计）人： | 马英新 | 申请（专利权）人： | 深圳市第二人民医院 |
| 主分类号： | C12Q1/34 | 分类号： | C12Q1/34;G01N21/64 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 张海平;向武桥 |
| 地址： | 518037 广东省深*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 半乳糖 活力 检测 试剂盒 方法 | ||
1.一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)和CdZnTeS量子点溶于反应缓冲液中所得的反应试剂，其中FDG的浓度为5-15ng/mL，CdZnTeS量子点的浓度为15-25nmol/mL。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述反应试剂中，所述FDG的浓度为10ng/mL，所述CdZnTeS量子点的浓度为20nmol/mL。
3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液为Tris缓冲液或PBS缓冲液，pH为7.5-8.5。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括标准色卡，所述标准色卡通过以下方法制作：
(A)配制二-β-D-吡喃半乳糖苷(FDG)和CdZnTeS量子点溶于Tris缓冲液的反应试剂，其中FDG的浓度为10ng/mL，CdZnTeS量子点的浓度为20nmol/mL，反应缓冲液的pH为8.0；
(B)取所述反应试剂的等分试样，向其中加入或不加入β-半乳糖苷酶标准品，使β-半乳糖苷酶浓度为0、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500U/L，得到系列反应混合物；
(C)将所述系列反应混合物在32℃下温育60分钟以进行酶促反应，得到系列酶促反应物；
(D)用480nm激发波长激发所述系列酶促反应物以显示系列发射荧光颜色，并获取所述系列酶促反应物的所述系列发射荧光颜色的图像；
(E)用所述系列发射荧光颜色的图像按β-半乳糖苷酶浓度顺序制作所述标准色卡。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括β-半乳糖苷酶标准品。
6.一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力非诊断性检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
(1)提供包含β-半乳糖苷酶的样品；
(2)使所述样品与根据权利要求1-3中任一项所述的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的反应试剂温育，以进行酶促反应；
(3)用480nm的激发波长激发酶促反应物以显示发射荧光颜色；
(4)根据所述发射荧光颜色判断所述样品中β-半乳糖苷酶活力的大小，其中所述发射荧光颜色越偏红色，表明β-半乳糖苷酶活力越小，所述发射荧光颜色越偏绿色，表明β-半乳糖苷酶活力越大。
7.一种基于比率荧光法的β-半乳糖苷酶活力非诊断性检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
(1)提供包含β-半乳糖苷酶的样品；
(2)使所述样品与根据权利要求4所述的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的反应试剂温育，以进行酶促反应；
(3)用480nm的激发波长激发酶促反应物以显示发射荧光颜色；
(4)将所述发射荧光颜色与根据权利要求4所述的β-半乳糖苷酶活力检测试剂盒中的标准色卡的颜色进行比对，判断所述样品中β-半乳糖苷酶活力的数值。
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