[发明专利]一种复合型聚合物层析介质的制备方法

说明书

本发明公开了一种复合型聚合物层析介质的制备方法，首先将核壳型聚合物微球加入到带有大量电荷的水溶性多胺的去离子水中，搅拌均匀，并保持一定温度和转速进行反应；再选取高分子量中性高分子化合物与聚合物微球在一定温度和转速下进行反应，将其偶联至所述聚合物微球的壳层表面，制备得到表面中性、内部为离子交换基团的复合型聚合物层析介质。该方法制备过程简单、操作步骤少、安全环保，表面能够截留的蛋白粒径范围为20‑400nm，所制备的层析介质可以广泛适用于大部分病毒的中度和精细纯化。

技术领域

本发明涉及聚合物层析填料技术领域，尤其涉及一种复合型聚合物层析介质的制备方法。

背景技术

复合型层析介质是一类具有双重或多重功能性的纯化填料，可以同时应用多个分离机理来达到更加高效的纯化结果，广泛应用于疫苗研制中的病毒纯化、色谱分离、生物医药等领域。

该类型的层析介质通常是通过偶联具有不同性质的配基来达到亲水或疏水作用或者是通过偶联带有不同电荷的配基来吸附带相反电荷的物质，再通过改变缓冲液pH来使配基和分离物带有正负不同的电荷，当配基与分离物具有相同电荷时形成静电排斥从而达到洗脱与分离等效果。但由于需要具备多种功能，需要偶联带有不同配基的物质或者一种物质上具有不同性质的配基，这使得基质表面需要提供足够多的结合位点，同时配基之间也会产生位阻效应导致不同配基之间的比例无法控制，配基的密度也不是很高；另外在分离不同蛋白时还需要重新选择合适的配基进行偶联，增加了多次制备的成本，应用范围也有局限性。因此针对复合型层析介质亟需开发一种适用范围广、制备方法简单、分离效果好的介质。

发明内容

本发明的目的是提供一种复合型聚合物层析介质的制备方法，该方法制备过程简单、操作步骤少、安全环保，表面能够截留的蛋白粒径范围为20-400nm，所制备的层析介质可以广泛适用于大部分病毒的中度和精细纯化。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种复合型聚合物层析介质的制备方法，所述方法包括：

步骤1、首先将核壳型聚合物微球加入到带有大量电荷的水溶性多胺的去离子水中，搅拌均匀，并保持一定温度和转速进行反应；

步骤2、再选取高分子量中性高分子化合物与所述步骤1反应后的聚合物微球在一定温度和转速下进行反应，将其偶联至所述聚合物微球的壳层表面，制备得到表面中性、内部为离子交换基团的复合型聚合物层析介质。

在步骤1中，所选用的水溶性多胺包括四乙烯五胺、聚乙烯亚胺或乙二胺。

在步骤1中，所选用水溶性多胺的用量为聚合物微球质量的0.5-10倍。

在步骤1中，反应的温度范围为30-60℃，转速为80-140r/min，反应时间为12-36h。

在步骤2中，所选取的高分子量中性高分子化合物包括醛基化葡聚糖、醛基化聚乙烯醇、醛基化琼脂糖、醛基化纤维素中的一种或多种。

在步骤2中，所选取的高分子量中性高分子化合物的平均分子量范围为1000000-10000000。

在步骤2中，所选取的高分子量中性高分子化合物的质量用量为聚合物微球质量的0.1-5倍。

在步骤2中，进行反应的温度范围为5-25℃，转速为80-140r/min，反应时间为24-48h。

由上述本发明提供的技术方案可以看出，上述方法制备过程简单、操作步骤少、安全环保，表面能够截留的蛋白粒径范围为20-400nm，所制备的层析介质可以广泛适用于大部分病毒的中度和精细纯化。

附图说明