[发明专利]肾移植术后早期发生人巨细胞病毒感染相关宿主miRNAs表达谱

说明书

本发明属于生物技术和医学领域，公开了一种肾移植术后早期发生人巨细胞病毒感染后人宿主miRNAs表达谱，利用筛查与肾移植术后早期发生人巨细胞病毒(hCMV)感染相关近期发生人巨细胞病毒感染相关宿主miRNAs表达谱成功筛选得到肾移植术后早期hCMV感染后显著异性差异表达的宿主miRNAs共456个。通过生物信息学分析、miRNAs靶标基因预测及蛋白功能分析等。本发明首次发现宿主hsa‑miR‑495‑3p、hsa‑miR‑532‑3p和hsa‑miR‑1224‑5p是调控人细胞Wnt/β‑catenin信号通路的核心miRNAs簇；该发现为该疾病的诊断或防治提供了新的靶点。

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，尤其涉及一种肾移植术后早期发生人巨细胞病毒感染相关宿主miRNAs表达谱。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

通过RT-PCR等技术验证某一种或几种已知的病毒或宿主候选miRNAs对其靶标蛋白或信号通路的影响；2.通过芯片或测序技术发现新的病毒或宿主候选miRNAs对其靶标蛋白或信号通路的影响。其中第1种技术是目前最常用的技术，但第2种技术较少使用。通过测序技术绘制CMV病毒感染宿主细胞后宿主细胞miRNAs表达谱改变为本发明特有的。

器官移植术后受体感染间质性肺炎是造成手术近期死亡的最主要原因之一，严重影响患者生存率。间质性肺炎多由病毒感染所致，其中以巨细胞病毒(HumanCytomegalovirus,hCMV)感染最为熟知。其中，肾移植术后的hCMV感染可以分为术后早期(3-6个月)感染(early-onset)和术后远期(大于6个月)感染(late-onset)，其中以术后早期感染最为常见。由于术后早期剂量的免疫制剂的使用，移植受者极易发生hCMV机会感染。据统计，hCMV病在移植术后三个月内的发生率约为55％。大量且持续的研究表明，经典的Wnt/β-catenin信号通路是hCMV感染中非常重要的信号通路之一。阐明Wnt/β-catenin信号通路在hCMV感染中的分子机制，对于hCMV感染的早期预警和干预靶点的选择具有十分重要的研究意义。

近年来的研究表明，病毒自身也可以编码多种非编码RNAs(no-coding RNAs,ncRNAs)，包括microRNAs和长非编码RNAs(long ncRNAs,lncRNAs)等,由病毒编码产生ncRNAs，对病毒的活化、复制和感染十分重要。Zhang等在2016年2月发表于Cell Research的一项最新的研究数据显示，埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)编码产生的miR-VP-3p在病毒感染初期就稳定表达，通过检测人体血清中miR-VP-3p的含量可以判断EBOV的感染情况。该研究说明，MicroRNAs可以作为病毒感染早期诊断的标志物。HCMV至少可以编码14种microRNAs，其中，HCMV-miR-UL22A-5p、hCMV-miR-UL112等已经证明能显著影响宿主免疫系统相关蛋白的表达水平。而hCMV感染中宿主细胞的miRNAs参与疾病的分子机制缺乏全面系统的研究，且均集中体外细胞学研究，尚缺乏体内研究证据支持。此外，miRNAs参与肾移植术后早期hCMV感染的具体分子机制尚待阐明。

综上所述，现有技术存在的问题是：

通过对某一个或某几个疾病发生相关的miRNAs的研究，无法系统地阐明病毒对宿主细胞转录组，尤其是非编码RNAs组的影响，更无法进一步全面地阐述非编码RNAs如miRNAs在病毒感染宿主细胞中作用机制。另一方面，目前已有的研究技术均集中体外细胞学研究，尚缺乏体内研究证据支持。

解决上述技术问题的难度：如需要解决上述问题，需要通过对疾病发生与健康群体样本进行整个非编码RNAs组的测序，才能全面绘制CMV病毒感染后宿主miRNAs的表达谱。