[发明专利]一种动物体内马钱子生物碱的快速检测方法

说明书

本发明涉及了一种动物体内马钱子生物碱的快速检测方法，包括以下步骤：(1)取中毒动物体液，配制成待测样液；(2)将所述步骤(1)得到的待测样液用去蛋白剂除杂、净化后，再用高效液相色谱‑质谱法测定，即可。本发明的动物体内马钱子生物碱的快速检测方法简单易行、通过高效液相色谱‑质谱法检测，操作方便，结合HRMS分析，可快速准确检测出动物体内马钱子生物碱的含量，有助于后期对于治疗药物的筛选和评价。

技术领域

本发明涉及食品毒素的检测方法，特别涉及一种动物体内马钱子生物碱的快速检测方法。

技术背景

马钱子，别名：番木鳖、苦实把豆儿、火失刻把都、苦实、马前、牛眼、大方八、马钱树，生长于深山老林中，喜热带湿润性气候，怕霜冻，而以石灰质壤土或微酸性粘壤土生长较好。我国台湾、福建、广东、海南、广西和云南南部等地有栽培。马钱子中主要含番木鳖碱(士的宁)和马钱子碱，两者均有大毒，主要是神经系统毒性。其中毒机制与以下因素有关：番木鳖碱阻止胆碱酯酶对乙酰胆碱的破坏，乙酰胆碱潴留于组织内，致整个中枢神经系统兴奋；中毒量的番木鳖碱能使大脑皮层发生超限抑制，引起脊髓反射性兴奋的显著亢进和特殊的强直性痉挛，常因呼吸肌强直性收缩而窒息死亡；马钱子碱极大剂量时可阻断神经肌肉传导呈现箭毒样作用。成人一次服5～10mg的番木鳖碱可致中毒，30mg可致死亡，死亡原因是由于强直性惊厥反复发作造成衰竭与窒息而致。

目前，对动物体内马钱子生物碱含量检测方法报道的文献较少。所以，开发一种快速、准确、稳定的检测生物样品中马钱子生物碱含量的方法尤为重要。

发明内容

本发明提供了一种动物体内马钱子生物碱的快速检测方法，该方法可以对马钱子生物碱的中毒结果进行更快速准确的检测。

为解决上述技术问题，本发明提供了以下的技术方案：一种动物体内马钱子生物碱的快速检测方法，包括以下步骤：

(1)取中毒动物体液，配制成待测样液；

(2)将所述步骤(1)得到的待测样液用去蛋白剂除杂、净化后，再用高效液相色谱-质谱法测定，即可。

进一步地，所述步骤(2)中的高效液相色谱采用3×100mm，1.9μm的C18色谱柱；进样量为1μL；柱温为35℃；5mmol/L乙酸铵-0.1％甲酸为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，其中流动相A:流动相B的体积比为90～10:10～90。

进一步地，所述步骤(2)中的质谱条件：分辨率为70000，毛细管温度为320℃，辅助气温度为350℃；扫描质量范围为60～700amu，扫描模式为全扫描+全碎裂。

进一步地，所述步骤(2)中待测样液与去蛋白剂的体积比为2～3:5～6。

进一步地，所述步骤(2)中待测样液与去蛋白剂的体积比为2:5。

进一步地，所述去蛋白剂为1％～3％的甲酸乙腈溶液。

进一步地，所述步骤(1)中，中毒动物体液为尿液、血液和胃内容物中的一种或几种。

与现有技术相比，本发明的动物体内马钱子生物碱的快速检测方法的有益效果为：

该方法简单易行、通过高效液相色谱-质谱法检测，操作方便；结合HRMS分析，可快速准确检测出动物体内马钱子生物碱的含量，有助于后期对于治疗药物的筛选和评价。

附图说明

下面结合附图中的具体实施例对本发明的技术方案做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。

图1为马钱子生物碱的主成分分析对比图之一；

图2为马钱子生物碱的主成分分析对比图之二；

图3为马钱子生物碱的主成分分析对比图之三。