[发明专利]spoIIIJ蛋白作为芽孢杆菌表面展示系统中锚定蛋白的用途在审
| 申请号： | 201910133957.6 | 申请日： | 2019-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN109852632A | 公开（公告）日： | 2019-06-07 |
| 发明（设计）人： | 关菲菲;田健;伍宁丰;丁尊丹;余小霞;刘晓青;初晓宇 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N1/21;C12N15/62;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人： | 余光军;张瑞雪 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 芽孢杆菌 表面展示系统 锚定蛋白 蛋白 编码基因 目的蛋白 融合基因 芽孢表面 宿主菌 外源目的蛋白基因 穿梭表达载体 枯草芽孢杆菌 高通量筛选 生物传感器 大分子量 固定化酶 生物吸附 重金属 抗原 多肽 构建 外源 原核 制备 展示 融合 应用 生产 | ||
1.spoIIIJ蛋白作为芽孢杆菌表面展示系统中锚定蛋白的用途。
2.按照权利要求1所述的用途，其特征在于，包括：将spoIIIJ蛋白编码基因与待表达的外源目的蛋白编码基因融合得到融合基因；将该融合基因与原核穿梭载体可操作的连接在一起得到重组质粒；将重组质粒转化芽孢杆菌得到重组菌株；将重组菌株在LB培养基中进行诱导表达，使外源目的蛋白在芽孢杆菌的菌体表面进行展示表达。
3.按照权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
4.按照权利要求1所述的用途，其特征在于：所述spoIIIJ蛋白的编码基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。
5.一种芽胞杆菌表面展示系统，包括：含有融合基因的原核穿梭表达载体以及宿主菌；所述的融合基因由锚定蛋白编码基因和外源目的蛋白编码基因连接在一起得到；其中，所述的锚定蛋白是spoIIIJ蛋白，其编码基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。
6.按照权利要求5所述的芽胞杆菌表面展示系统，其特征在于：所述的融合基因由锚定蛋白编码基因和外源目的蛋白编码基因通过一个连接肽基因连接在一起而得到。
7.按照权利要求6所述的芽胞杆菌表面展示系统，其特征在于：所述的连接肽基因选自SEQ ID No.3、SEQ ID No.4或SEQ ID No.5所示的任何一种核苷酸序列。
8.按照权利要求6所述的芽胞杆菌表面展示系统，其特征在于：所述的宿主菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
9.按照权利要求5所述的芽胞杆菌表面展示系统，其特征在于：所述的外源目的蛋白是有机磷降解酶。
10.一种将外源目的蛋白基因在芽孢杆菌的表面进行展示的方法，其特征在于，包括：将spoIIIJ蛋白编码基因与待表达的外源目的蛋白编码基因通过一个连接肽基因连接在一起融合得到融合基因，将该融合基因与原核穿梭载体可操作的连接在一起得到重组质粒；将重组质粒转入到芽孢杆菌后在LB培养基中进行培养，使外源目的蛋白在芽孢杆菌的菌体表面进行展示表达；其中，所述的连接肽基因核苷酸序列为SEQ ID No.3、SEQ ID No.4或SEQ ID No.5所示；所述的宿主菌优选为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；所述的原核穿梭载体是pHY300plk2。
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