[发明专利]一种高活性无细胞蛋白表达试剂盒

权利要求书

1.一种高活性无细胞蛋白表达试剂盒，其特征是包括：无细胞蛋白表达冻干粉和谷氨酸镁，所述无细胞蛋白表达冻干粉用下述方法制成：

(1)按质量比为(0.4-5):1000的比例，称取谷氨酸镁和组合物1，混合；所述的组合物1按1g:0.01～0.1ml:1～3ml比例包括细胞破碎产物、缓冲溶液1和缓冲溶液2；

(2)向步骤(1)获得的混合物中，加入组合物2，混合均匀；所述组合物1和组合物2的体积比为1:(1-3)；所述的组合物2按体积比为(2-8):(20-30):(2-5):1的比例包括氨基酸混合液、反应缓冲液、能量补充液和浓度为5-150μg/ml的核糖核酸聚合酶水溶液：

(3)冷冻干燥，得到无细胞蛋白表达冻干粉；

所述缓冲溶液1包括：5-20mmol/L三羟甲基氨基甲烷，30-100mmol/L谷氨酸钾，10-20mmol/L谷氨酸镁，0.5-2mmol/L二硫苏糖醇，5-10mmol/L 2-巯基乙醇，溶剂是去离子水；

所述缓冲溶液2包括：5-20mmol/L三羟甲基氨基甲烷，30-100mmol/L谷氨酸钾，10-20mmol/L谷氨酸镁，0.5-2mmol/L二硫苏糖醇；溶剂是去离子水；

所述反应缓冲液包括：40-60mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、80-120mmol/L谷氨酸钾、10-40mmol/L 3-磷酸甘油酸、5-10mmol/L环磷酸腺苷、2-4mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、1-4mmol/L辅酶A、0.4-0.8mmol/L亚叶酸、1-5mg/mL转运核糖核酸、0.4-0.8mmol/L亚精胺；溶剂是去离子水；

所述能量补充液包括：1-3mmol/L三磷酸尿苷，1-3mmol/L三磷酸胞苷，1-3mmol/L三磷酸腺苷，3-9mmol/L三磷酸鸟苷，溶剂是去离子水；

所述步骤(3)冷冻干燥的步骤为：将步骤(2)获得的混合物在液氮中冷冻，再于-80℃冷冻6-12h，-50℃～-30℃干燥4-48h。

2.根据权利要求1所述的一种高活性无细胞蛋白表达试剂盒，其特征是步骤(1)所述细胞为真核细胞或原核细胞。

3.根据权利要求1所述的一种高活性无细胞蛋白表达试剂盒，其特征是氨基酸混合液为用甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸加入水配成的等摩尔浓度的、摩尔浓度为5-20mmol/L的混合液。

4.权利要求1-3之一的一种高活性无细胞蛋白表达试剂盒的使用方法，其特征是包括如下步骤：

(1)取无细胞蛋白表达冻干粉0.1-2mg，用30-80μl的去离子水溶解；

(2)按质量，将0.5-2.0份的谷氨酸镁加入到1000份步骤(1)获得的液体中；

(3)向步骤(2)得到的体系中加入基因，在25℃～30℃，表达，得到蛋白质。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征是所述基因为能表达所需蛋白质的基因组、质粒、带有目的基因的线性双链脱氧核糖核酸、单链脱氧核糖核酸片段和核糖核酸中的至少一种。