[发明专利]一种靶向性抗肿瘤T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向性抗肿瘤T细胞，包括靶向CEA的嵌合抗原受体CAR‑CEA和靶向MUC1的嵌合抗原受体CAR‑MUC1，该T细胞能同时识别两种不同的肝癌靶点CEA及MUC1，对肿瘤细胞的靶向识别性广且强，可避免肿瘤细胞出现靶点逃逸，扩大了其广谱杀伤性，提升了肿瘤杀伤能力，增强了免疫细胞的体内持久性。本发明还提供了该靶向性抗肿瘤T细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向性抗肿瘤T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界范围内排位第五位的最常见的恶性肿瘤。在我国，每年由于肝癌死亡的人数超过十万。而嵌合抗原受体T细胞(ChimericAntigen Receptor T-Cell，CAR-T)作为当前最新的免疫细胞技术之一，因其治疗肿瘤具有特异性强、几乎无毒副作用的巨大优势而弥补了传统疗法的弊端，受到了广泛的关注和研究。它是将经过CAR改造的T细胞回输至人体，激活自身免疫系统，对肿瘤细胞进行杀伤，以达到清除恶性肿瘤细胞的目的，被认为最有可能彻底清除肿瘤细胞的方法。

但目前CAR-T技术的应用还局限于白血病、骨髓瘤、淋巴瘤等血液系统肿瘤，在诸如肝癌等实体肿瘤中的应用较少，且在复杂的肿瘤微环境中(如多种肿瘤抗原同时出现的情况)，CAR-T细胞对肿瘤细胞的识别、杀伤能力大大降低，限制了其临床应用。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种针对肝癌的靶向性抗肿瘤T细胞及其制备方法和应用。该T细胞可高效靶向至肝癌细胞的两个肿瘤靶点，对肝癌细胞的靶向性高、识别性较广且强，可避免肿瘤细胞出现靶点逃逸，具有较强的肝癌细胞杀伤性。

第一方面，本发明提供了一种靶向性抗肿瘤T细胞，所述靶向性抗肿瘤T细胞为带靶向CEA的嵌合抗原受体CAR-CEA和带靶向MUC1的嵌合抗原受体CAR-MUC1的双靶点嵌合抗原受体T细胞，或者为带所述CAR-CEA的嵌合抗原受体T细胞和带所述CAR-MUC1的嵌合抗原受体T细胞的混合，或者为带所述CAR-CEA的嵌合抗原受体T细胞和带所述CAR-MUC1的嵌合抗原受体T细胞的一种或多种与带所述CAR-CEA和所述CAR-MUC1的双靶点嵌合抗原受体T细胞的混合；其中，所述CAR-CEA包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向CEA的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，所述CAR-MUC1包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向MUC1的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；其中，所述靶向CEA的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向MUC1的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

其中，当所述靶向性抗肿瘤T细胞为带CAR-CEA和CAR-MUC1的双靶点CAR-T时，嵌合抗原受体CAR-CEA和CAR-MUC1的分布位置不作限定，可以是交替分布(例如ABAB…，AABABB…)或依次分布(例如AAAA…BBB…)，但两者之间并无共价连接，此时它们相应的CEA单链抗体和MUC1单链抗体之间也并无共价连接，这样可使它们保持较好的识别能力。

上述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向CEA的单链抗体或所述靶向MUC1的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述胞外铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述胞内信号区的氨基酸序列的氨基端相连。