[发明专利]荧光探针化合物及制备方法及其检测内毒素的应用和方法

说明书

本发明涉及内毒素检测技术领域，针对荧光探针只能用于不含有碘离子置换成分的样品的问题，提供了一种荧光探针化合物：荧光探针化合物为4‑(4‑(1,2,2‑三苯基乙烯基)苯基)乙基吡啶碘盐，分子式为C33H28NI，结构式为：一种应用上述的荧光探针化合物检测内毒素的方法：包括，(1)制备储存液；(2)制备标准品溶液；(3)制备标准反应液与待测反应液；(4)检测得出标准荧光曲线与待测荧光曲线；(5)对比待测荧光曲线与标准荧光曲线得出待测溶液中的内毒素含量是否达标。当待测体系中含有能置换碘离子的成分时，由于TPEPyE具有较好的水溶性，在不含有LPS分子的溶液中不能形成聚集体，因此不会发射出荧光，从而可以排除碘离子置换物对检测的干扰。

技术领域

本发明涉及内毒素检测技术领域，尤其是涉及一种荧光探针化合物及制备方法及其检测内毒素的应用和方法。

背景技术

细菌内毒素广泛存在于自然界中，例如，自来水中的内毒素含量为1-100EU/mL。当内毒素通过消化道进入人体时并不会产生毒性，但如果内毒素通过注射等方式进入血液则会引起不同的疾病。内毒素小量入血后可被肝脏枯否细胞灭活，不造成机体受损。内毒素大量进入血液就会引起发热反应，严重时甚至会导致死亡。因此，生物制品类、注射用药剂、化学药品类、放射性药物、抗生素类、疫苗类、透析液等制剂以及医疗器材类(如一次性注射器，植入性生物材料)必须在细菌内毒素检测试验合格后才能使用。

早期，最常用的热原(内毒素)检测方法是家兔法。后来，随着生物技术的不断发展，细菌内毒素试验(bacterial endotoxins test,BET)逐渐替代了家兔热原试验，成为细菌内毒素检测最常用的方法。BET法即利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的含量是否符合规定的一种方法。这里所说的“鲎试剂”来源于海洋生物“鲎”的蓝色血液，它能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素。BET法可分为两种，即凝胶法和光度测定法，后者又包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，应以凝胶限度试验结果为准。

凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理进行限度检测或半定量检测内毒素的方法。

浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。根据检测原理，可分为终点浊度法和动态浊度法。终点浊度法是依据反应混合物中的内毒素含量和其在孵育终止时的浊度(吸光度或透光率)之间存在的量化关系来测定内毒素含量的方法。动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度或透光率所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。

显色基质法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少而测定内毒素含量的方法。根据检测原理，分为终点显色法和动态显色法。终点显色法是依据反应混合物中内毒素含量和其在孵育终止时释放出的呈色团的量之间存在的量化关系来测定内毒素含量的方法。动态显色法是检测反应混合物的吸光度或透光率达到某一预先设定的检测值所需要的反应时间，或检测值增加速度的方法。

鲎试剂虽然是检测内毒素较好的试剂，但其需要采集鲎的血液，对海洋生态环境造成影响，同时受限于鲎繁殖能力低下的影响，进而影响产能，且鲎试剂的质量受限于鲎的血液质量，难以把控。

因此中国专利CN105623645B公开了一种基于聚集诱导发光原理的荧光探针及其制备方法、应用和检测内毒素方法，其荧光探针3-乙基-2-(4-1，2，2-三苯基乙烯)烯基-苯并噻唑碘盐(TPE-Be-I)能通过人工合成的方式进行生产，摆脱了鲎的制约。