[发明专利]基于多克隆抗体制备的HDL3免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法

说明书

本发明提供了一种基于多克隆抗体制备的HDL3免疫比浊法检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，试剂R1：Tris‑HCl、PEG 6000、BSA、NaCl、NaN₃、EDTA、Polyoxyethylene styrenated phenyl ether derivative、鸡抗人HDL3多克隆抗体；试剂R2：Tris‑HCl、PEG 6000、BSA、NaCl、NaN₃、EDTA、Polyoxyethylene polycyclic phenyl ether。本发明还提供了一种上述试剂盒的制备与使用方法。本发明试剂盒利用免疫比浊法测定HDL3，能直接测定HDL3含量，测试结果更可靠。

技术领域

本发明属于免疫学测定分析领域，涉及蛋白质的测量测试，尤其涉及一种基于多克隆抗体制备的HDL3免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法。

背景技术

高密度脂蛋白3(High-density lipoprotein 3，HDL3)是高密度脂蛋白(High-density lipoprotein，HDL)的亚组分之一。HDL是血浆中主要脂蛋白之一，其密度最高，颗粒直径最小，蛋白组成以载脂蛋白为主，有HDL1、HDL2和HDL3 3种亚型。人类HDL颗粒大小为7.2-12.9nm，水合密度介于(1.063-1.210)g/mL之间，相对分子质量为200-400kD。HDL3的密度为1.125g/mL-1.210g/mL。

HDL主要由肝脏产生，而且主要又是由肝脏分解，小肠亦可合成。首先ApoA-I初步酯化，在LPL介导的脂解作用下，从CM、VLDL获得载脂蛋白，形成盘状新生HDL。新生HDL在LCAT的作用下先转变为HDL3，然后酯化胆固醇继续增加，逐步变为密度较小、颗粒较大的HDL2。HDL的重要生理功能是介导胆固醇逆转运，还为其他脂蛋白提供多种必需成分，具有抗动脉粥样硬化和血管保护作用，可减少心血管事件的发生。流行病学调查显示，血浆HDL-C水平与动脉粥样硬化等心血管疾病的危险性呈高度负相关。HDL-C可对抗由血脂代谢紊乱引起的心血管疾病，升高HDL-C有可能成为冠心病防治的有效措施。且有报道动物实验证明，HDL中起作用的亚组分为HDL3，而HDL2在调节血脂(及逆向胆固醇转运)方面并没有可观测到的作用。所以，HDL3可以用作心血管疾病的治疗剂，也可以用于心血管疾病、糖尿病、肾脏疾病的检测标志物。

抗体是由抗原刺激机体，产生的免疫球蛋白。抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原刺激所产生的抗体称之为单克隆抗体(Monoclone antibody)。由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一种抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。

免疫比浊法(Turbidimetric inhibition immuno assay)是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度；当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。