[发明专利]应用多孔材料分离混合斑中精子的方法

权利要求书

1.一种应用多孔材料分离混合斑中精子的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)混合斑的前处理：取附有精子和其它细胞成分的混合斑的物证，用细胞洗脱液将精子细胞与其它细胞成分从物证上脱离下来，得到含有精子与其它成分的混合液；

(2)精子与多孔材料的结合：取多孔材料吸附件，所述的多孔材料吸附件的主体为多孔材料吸附片，多孔材料吸附片的材质为不锈钢或碳化硅或镍或铬或钛，多孔材料的微孔孔径大小为1～15微米；取步骤(1)的混合液，将混合液倒在多孔材料吸附片上，混合液从多孔材料吸附片的上表面进入材料内部然后从下表面滴落，滴落后的液体丢弃，保留多孔材料吸附片；

(3)多孔材料表面其它细胞成分的去除：将步骤(2)得到的多孔材料吸附片用TES洗液洗涤去除多孔材料表面粘附的除精子外的其它细胞及其DNA；

(4)将步骤(3)得到的多孔材料吸附片用精子消化液消化，使附着在多孔材料微孔内的精子被洗脱到精子消化液中，得到精子DNA溶液。

2.如权利要求1所述的应用多孔材料分离混合斑中精子的方法，其特征在于：步骤(2)中所述多孔材料吸附片的厚度为0.5～3毫米。

3.如权利要求1所述的应用多孔材料分离混合斑中精子的方法，其特征在于：步骤(3)得到的多孔材料吸附片用细胞消化液洗涤进一步去除除精子外的其它细胞及其DNA。

4.如权利要求3所述的应用多孔材料分离混合斑中精子的方法，其特征在于：所述细胞消化液包含的组分及其在细胞消化液中的终浓度为：50mM TES洗液、0.36mM氯化钠、100μg/ml蛋白酶K、1％SDS或者1％SLS。

5.如权利要求1所述的应用多孔材料分离混合斑中精子的方法，其特征在于：步骤(1)中所述细胞洗脱液为0.9％生理盐水。

6.如权利要求1所述的应用多孔材料分离混合斑中精子的方法，其特征在于：步骤(3)中所述TES洗液保护的组分及各组分终浓度为：pH8.0 Tris-HCl 10mmoL/L、EDTA 1mmoL/L、SDS 0.1mmoL/L。

7.如权利要求1所述的应用多孔材料分离混合斑中精子的方法，其特征在于：步骤(4)中所述精子消化液包含的组分及其在精子消化液中的终浓度为：Tris 1.21g/L、NaCl5.84g/L、EDTA 0.37g/L、蛋白酶K 100μg/ml、DTT 0.04M；或者

精子消化液包含的组分及其在精子消化液中的终浓度为：G2裂解液50～300μL/L、蛋白酶K 100μg/ml、DTT 0.04M。

8.如权利要求1至7任一项所述的应用多孔材料分离混合斑中精子的方法，其特征在于：步骤(2)中所述多孔材料吸附件还包括两头均敞口的中空管，所述中空管内设置有多孔材料吸附片，所述多孔材料吸附片将中空管内部分隔成上腔和下腔。

9.如权利要求8所述的应用多孔材料分离混合斑中精子的方法，其特征在于：所述多孔材料吸附件还包括卡套，所述多孔材料吸附片卡在所述卡套内，卡套设置在中空管内中部。