[发明专利]一种用于检测毛皮海豹粪便相关环状单链DNA病毒的PCR引物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测毛皮海豹粪便相关环状单链DNA病毒(Fur seal feces‑associated circular ssDNA virus，FSfaCV)的PCR引物及其应用。所述的引物由上游引物和下游引物组成，其中，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。采用本发明设计的特异性FSfaCV PCR检测引物，病毒基因组在1.52×10³拷贝/μL以上时均可准确检测出FSfaCV，且不与猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、非洲猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、H3N2和H1N1亚型猪流感病毒、猪呼肠病毒反应，具有灵敏度高、特异性好、方便、准确和高效的优点。

技术领域

本发明涉及一种用于检测毛皮海豹粪便相关环状单链DNA病毒的PCR引物及其应用。本发明属于生物技术领域。

背景技术

毛皮海豹粪便相关环状单链DNA病毒(Fur seal feces-associated circularssDNA virus，FSfaCV)是一种新型环状单链DNA病毒，属于环状病毒科，环病毒属。该病毒于2012年首次从新西兰毛皮海豹粪便中鉴定出来，病毒(a50株)基因组全长为2925个核苷酸(nt)，包括两个开放阅读框，分别编码Rep复制酶和Cap衣壳蛋白。日本学者于2014年从仔猪粪便样本中也检测到该病毒，鉴定出一株病毒FSfaCV-J1，其基因组全长为2916nt，与新西兰a50毒株的核苷酸同源性为92％；病原性检测发现，该病毒在仔猪中的阳性率达到76％(65/85)。迄今为止，只有这两起关于该病毒的相关报道。该病毒的生态学分布、宿主嗜性、病原学特征、诊断方法、以及对猪的致病特性等相关信息均鲜为人知。

因此，开展FSfaCV的流行病学研究具有重要意义。而诊断方法的建立则是开展该病毒流行病学研究的基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测毛皮海豹粪便相关环状单链DNA病毒的特异性PCR引物，通过该引物对FSfaCV进行鉴定，使FSfaCV的检测更便捷和高效。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种用于检测毛皮海豹粪便相关环状单链DNA病毒的PCR引物，由上游引物和下游引物组成，其中，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

其中，优选的，所述的PCR引物用于检测毛皮海豹粪便相关环状单链DNA病毒时，其PCR反应体系为20μL，其中包括：

其中，优选的，模板中病毒基因组浓度为1.52×10³拷贝/μL以上。

其中，优选的，所述的PCR引物用于检测毛皮海豹粪便相关环状单链DNA病毒时，其PCR反应条件为：95℃预变性3分钟；98℃变性10秒，52℃退火30秒，72℃延伸40秒，30个循环，72℃后延伸7分钟。

进一步的，本发明还提出了所述的PCR引物在制备检测毛皮海豹粪便相关环状单链DNA病毒试剂中的应用。

相较于现有技术，本发明的有益效果是：

1、本发明通过设计一对特异性FSfaCV PCR检测引物，能够便于对FSfaCV的检测，从而提高检测效率。