[发明专利]一种利用纳米金直接标记引物的快速检测非洲猪瘟的试剂盒

说明书

本发明公开了一种利用纳米金直接标记引物的快速检测非洲猪瘟的试剂盒。它包括快速检测非洲猪瘟的试纸条、引物对和缓冲溶液；试纸条包括样品吸收垫、反应膜、吸水垫和底板；沿样品流动方向，样品吸收垫、反应膜、吸水垫依次固定于底板上；试纸条的反应膜上包括检测区和质控区；检测区包被链霉亲和素；质控区包被连接有链霉亲和素或生物素的质控探针；引物对为5'端标记纳米金的上游引物和修饰生物素的下游引物。本发明利用纳米金直接标记于特异性PCR引物，借助于双链互补原则，以及普通PCR，降低了试剂盒成本，实现简单快速低成本的现场检测。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中的检测试剂盒，特别是涉及检测疾病的试剂盒，尤其是涉及一种利用纳米金直接标记引物的快速检测非洲猪瘟的试剂盒。

背景技术

非洲猪瘟（African Swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种烈性、高度接触性传染病。非洲猪瘟病毒（African Swine fever virus，ASFV）是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员。由于该病的高发病率和高致死率对养猪业可造成巨大的经济损失，中国将非洲猪瘟规定为一类动物传染病，世界动物卫生组织将其列为法定报告的动物疫病。建立快速、灵敏、特异的检测方法对于ASFV的防控至关重要。

目前，ASF诊断方法有红细胞吸附试验、直接免疫荧光实验、间接免疫荧光实验、检测病毒核酸等方法。其中核酸检测方法因其简单的操作和高度的敏感性而被广泛应用。检测ASFV核酸的方法有普通聚合酶链式反应、实时聚合酶链式反应等。

试纸条是一种简单方便灵敏的现场快速检测产品，已被广泛应用于检测行业。目前，大多是使用抗原抗体的方法进行试纸条显色反应，成本高，反应不够快速。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用纳米金直接标记引物的快速检测非洲猪瘟的试剂盒。

本发明设计了非洲猪瘟的特异性PCR引物，利用纳米金直接标记于引物，开发了一种基于PCR试纸条技术的非洲猪瘟鉴别试剂盒；相比使用抗原抗体的方法进行试纸条显色反应，该方法借助于双链互补原则，以及普通PCR，降低了试剂盒成本，实现简单快速低成本的现场检测。

本发明提供的一种快速检测非洲猪瘟的试纸条，包括样品吸收垫、反应膜、吸水垫和底板；

沿样品流动方向，所述样品吸收垫、所述反应膜、所述吸水垫依次固定于所述底板上；

所述试纸条的反应膜上包括检测区和质控区；所述检测区包被链霉亲和素；所述质控区包被连接有链霉亲和素或生物素的质控探针；所述质控探针的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

上述的试纸条中，形成所述检测区的所述链霉亲和素的浓度可为4mg/mL~10mg/mL，具体可为5 mg/mL或4mg/mL~8mg/mL；

形成所述质控区的所述链霉亲和素或生物素的浓度可为1mg/mL；

所述质控探针的浓度可为100μM；

所述质控区包被有链霉亲和素或生物素的质控探针在反应膜上按照如下步骤得到：链霉亲和素或生物素与质控探针在反应膜上室温反应1~2小时。

本发明还提供了一种快速检测非洲猪瘟的试剂盒，包括快速检测非洲猪瘟的试纸条、引物对和缓冲溶液；

所述试纸条包括样品吸收垫、反应膜、吸水垫和底板；沿样品流动方向，所述样品吸收垫、所述反应膜、所述吸水垫依次固定于所述底板上；所述试纸条的反应膜上包括检测区和质控区；所述检测区包被链霉亲和素；所述质控区包被连接有链霉亲和素或生物素的质控探针；

所述引物对为5'端标记纳米金的上游引物和修饰生物素的下游引物。

本发明中，所述引物对用于扩增非洲猪瘟病毒。