[发明专利]一种从造血干细胞分化产生NK细胞的方法及其培养基

权利要求书

1.一种从造血干细胞分化产生NK细胞的方法，包括如下步骤：

(a)将造血干细胞接种于NK分化培养基I中，培养6-8天；

所述NK分化培养基I为在NK分化基础培养基中加入细胞因子SCF、IL3、IL7、IL15和Flt3-L后得到的培养基；

(b)完成步骤(a)后，采用NK分化培养基II进行半量换液，继续培养；培养期间每隔5-7天使用所述NK分化培养基II进行半量换液，直至获得NK细胞；

所述NK分化培养基II为在所述NK分化基础培养基中加入细胞因子SCF、IL15、IL7和Flt3-L后得到的培养基。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述NK分化基础培养基包括DMEM高糖培养基、“Ham's F-12Nutrient Mix，GlutaMAXTMSupplement培养基”、热灭活人AB血清、L-谷氨酸、2-巯基乙醇、亚硒酸钠、氨基乙醇和L-抗坏血酸。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

在所述NK分化培养基I中，所述SCF的浓度为15-25ng/mL；所述IL3的浓度为3-7ng/mL；所述IL7的浓度为15-25ng/mL；所述IL15的浓度为8-12ng/mL；所述Flt3-L的浓度为8-12ng/mL；和/或

在所述NK分化培养基II中，所述SCF的浓度为15-25ng/mL；所述IL15的浓度为8-12ng/mL；所述IL7的浓度为15-25ng/mL；所述Flt3-L的浓度为8-12ng/mL。

4.根据权利要求1至3任一所述的方法，其特征在于：

步骤(a)中，所述培养的条件为35-39℃、3-7％CO₂培养；和/或

步骤(b)中，所述培养的条件为35-39℃、3-7％CO₂培养。

5.根据权利要求1至4任一所述的方法，其特征在于：步骤(b)中，所述“直至培养获得NK细胞”为自步骤(a)接种到所述NK分化培养基I中开始计算的第21-28天。

6.培养基，其特征在于：所述培养基为权利要求1至5中任一所述NK分化培养基I或所述NK分化培养基II。

7.成套培养基，其特征在于：所述成套培养基包括权利要求1至5中任一所述NK分化培养基I和所述的NK分化培养基II。

8.如权利要求7所述成套培养基，其特征在于：所述成套培养基由权利要求1至5中任一所述NK分化培养基I和所述的NK分化培养基II组成。

9.权利要求6所述的培养基、或、权利要求7或8所述成套培养基在从造血干细胞分化产生NK细胞中的应用。

10.如权利要求1至5任一所述的方法或权利要求9所述的应用，其特征在于：所述造血干细胞为x1)或x2)：

x1)iPS细胞分化获得的造血干细胞；

x2)从离体的人源血液分离获得的造血干细胞。