[发明专利]一种人乳腺癌细胞MCF-7特异性检测方法

权利要求书

1.一种人乳腺癌细胞MCF-7特异性检测方法，其特征是包括以下步骤：

（1） 将制备好的10 ~ 50 μL PdAu纳米粒子旋涂工作电极表面；

（2） 在步骤（1）处理过的工作电极上滴加10 ~ 30 μL 10 mmol/L对巯基苯硼酸，静止5小时，工作电极修饰对巯基苯硼酸；

（3） 制备苯硼酸/三联吡啶钌@二氧化硅纳米复合物探针：1.77 mL 曲拉通X-100、7.5mL环己烷、1.8mL 正己醇，0.34 mL 40 mmol/L的三联吡啶钌溶液混合，搅拌30分钟，加入0.1 mL正硅酸乙酯，加入1 mL 1mol/L的氨水，溶液放置暗处搅拌12 小时，获得三联吡啶钌@二氧化硅纳米复合物，利用丙酮进行离心分离，随后用乙醇和超纯水洗涤，获得沉淀分散在5.0 mL乙醇中；2.0 mL 0.5mg/L的三联吡啶钌@二氧化硅乙醇溶液中加入0.5 mL 3-氨基丙基三乙氧基硅烷，搅拌4小时，产物进行离心分离、乙醇洗涤，得到端基为氨基的三联吡啶钌@二氧化硅纳米复合物，然后将其加入5.0 mL 5%的戊二醛中，37℃下搅拌反应2小时，离心分离，超纯水洗涤3次，所得产物分散在超纯水中，加入0.1 mL 0.2 mol/L的对氨基苯硼酸，37℃下搅拌反应2小时，离心、洗涤，得到苯硼酸/三联吡啶钌@二氧化硅纳米复合物探针；

（4） 在步骤（2）处理过的工作电极上滴加10 μL 浓度范围为5.0×10² ~ 2.0×10⁷cells/mL 人乳腺癌细胞MCF-7细胞溶液，在37℃下孵育1~ 2小时；

（5） 在步骤（4）处理过的工作电极上滴加10 ~ 30 μL 50 mg/L步骤（3）制得的苯硼酸/三联吡啶钌@二氧化硅纳米复合物探针，在37 ℃下孵育1~ 2小时；

（6） 将步骤（5）制得的工作电极置于含有0.1 mol/L 三丙胺和0.1 mol/L pH 7.4的磷酸缓冲溶液中，Ag/AgCl电极为参比电极，Pt电极为对电极，在电压范围为0 ~ −1.2 V，扫描速率为100 mV/s的条件下进行信号检测。

2.根据权利要求1所述的一种人乳腺癌细胞MCF-7特异性检测方法，其特征在于：步骤（1）中PdAu纳米粒子制备方法：0.4 mL 10 mmol/L四氯钯酸钠溶液，0.1 mL 10 mmol/L的氯金酸溶液，18 mg 氯化十六烷基吡啶，5 mL超纯水加入至烧瓶中，搅拌均匀后，加入新制备的0.3 mL 0.1 mol/L的抗坏血酸溶液，摇匀，密封，室温下放置3小时，所得产物离心分离，超纯水洗涤2次，最后，超声分散在2.0 mL超纯水中。