[发明专利]一种高亲和力抗环瓜氨酸肽四价小分子抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种高亲和力抗环瓜氨酸肽单链可变区四价小分子抗体。本发明证实了抗CCP抗体不仅仅是RA诊断的血清学标志，在RA的发病机制中也有重要作用，为以瓜氨酸化抗原为靶向的RA靶向治疗提供了试验依据。本发明中以CCP表位为治疗靶点和切入点，研究内容涉及CCP可能参与RA发病机制的多个水平，可以较系统、全面的揭示抗CCP抗体的在RA致病机制的作用。本发明采用的抗CCP‑ScFv抗体的肽链和P53构架的四聚体抗体都是完全人源化人源化序列，作用靶点于RA发病机制的起始和炎症慢性化过程，更具有针对性，不同于目前以拮抗RA发病机制下游下游炎症反应介质和炎症信号通路介质，靶点目标性更前缘，更为精准，具有较好技术成果转化潜力和向生物药品发展的前景。

技术领域

本发明涉及类风湿关节炎的诊断和治疗，具体涉及一种可用于诊断、治疗类风湿性关节炎的高亲和力抗环瓜氨酸肽四价小分子抗体。

背景技术

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一种以慢性、进展性滑膜炎为主要病理改变的多器官系统受累的自身免疫性疾病。我国患病率0.32-0.38％，累计人口超过500万人，有较高的致残率和死亡率。80％患者在发病2年内即出现骨质破坏。抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体对于RA诊断的敏感性61.6-75.2％和特异性94-99％，可在出现临床症状之前10年检出。近来越来越多的研究表明抗CCP抗体不仅仅是RA诊断的血清学标志，可能在RA的发病机制中也有重要作用。

在RA发病机制中,遗传－环境－免疫等多因素相互作用，是抗CCP抗体产生并向特异性自身免疫炎症过渡的重要中介缓解和免疫损伤介质。RA患者多携带HLA-DRB1*0401、*0404等等位基因型，其β链第70-74位氨基酸存在一段共同序列，称为RA共同表位(SE)，是HLA-DRB1的抗原结合槽的主要构成序列。自身抗原可能通过分子模拟或模糊识别机制与该抗原结合槽结合，递呈给T细胞。Hill等研究证实肽链精氨酸转化为瓜氨酸后进一步增加了与HLA-DRB1SE的亲和力100倍，进而诱导T细胞成熟，辅助B细胞的分化和成熟，产生瓜氨酸蛋白抗体(Anti-citrullinated protein antibodies，ACPA)。以瓜氨酸化纤维蛋白原免疫DR4-IE转基因鼠可产生关节炎。而非瓜氨酸化纤维蛋白原或免疫野生型C57BL/6则不能。HLA-DR B1基因多态性仅仅可解释约40-37％CCP+RA遗传背景，非编码HLA的基因影响更＜10％。编码参与肽翻译后瓜氨酸化修饰的酶PAD4的某些SNPs罕见基因型与RA的发生有关。2003年Suzuki等在对编码PADI的基因SNP研究中发现，日本人染色体lp36上的NT2034367.1区域的4个PADl4基因的SNP外显子SNP(PADl4_89、PADl4_90、PADl4_92、PADl4_104)单倍体型与RA易感性相关。在日本和韩国的后继报道中证实了上述结果。但在欧美裔人群却发现虽存在SNP多态性，却与RA易感性无关。