[发明专利]新型油性免疫佐剂及其制备方法和在抗体制备中的应用

说明书

本发明涉及一种新型油性免疫佐剂及其制备方法和在抗体制备中的应用，该新型油性免疫佐剂包括弗氏不完全佐剂、液体石蜡、多聚赖氨酸、羊毛脂、香菇多糖和Poly r(c)，通过适当的配比，制备出新型油性免疫佐剂，并使用该新型油性免疫佐剂在无不注射卡介苗的情况下制备出抗体。该新型油性免疫佐剂在基于弗氏不完全佐剂基础上，做了成分添加，使该新型油性免疫佐剂抗体制备时无需使用卡介苗；并且在使用该新型油性免疫佐剂抗体制备的过程中，不分弗氏完全佐剂与弗氏不完全佐剂，只需要购买其中一种产品；有效缩短了免疫周期，节省了宝贵时间；有效减少免疫次数，以及有效节省每针次的抗原用量，从而减少了抗原用量，极大的节省了珍贵抗原。

技术领域

本发明涉及新型油性免疫佐剂及其制备方法和在抗体制备中的应用。

背景技术

目前抗体制备领域，使用的免疫佐剂一般为上个世纪五十年代成功研发出来的，一般情况下，佐剂作为能同抗原一起或预先注射到机体内能增强免疫原性或改变免疫反应类型的物质，在新型、高效疫苗复合物的研发中受到研究者的广泛重视。佐剂又称非特异性免疫增生剂，本身不具抗原性，是一类先于抗原或与抗原同时作用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答的一种物质，即同抗原一起或预先注射到机体内能增强免疫原性或改变免疫反应类型。

免疫佐剂的主要生物作用包括以下几个方面：抗原物质混合佐剂注入机体后，改变了抗原的物理性状，可使抗原物质缓慢地释放，延长了抗原的作用时间；佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被抗原呈递细胞吞噬；佐剂能刺激抗原呈递细胞对抗原的处理；佐剂可促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作用；可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。

弗氏完全佐剂与弗氏不完全佐剂，作为经典的抗体制备和多克隆抗体制备用佐剂，是使用时间最久、效果最好的经典佐剂，为抗体制备的首选佐剂。但是使用弗氏完全佐剂与弗氏不完全佐剂抗体制备时存在各种问题：卡介苗是管制品，购买困难，给抗体制备带来了一定的困难；免疫周期一般在8-12周，免疫周期较长；对动物伤害大，容易引起动物的炎症反应，甚至造成动物死亡。这些问题都制约了抗体的制备过程。

发明内容

鉴于以上现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种新型油性免疫佐剂及其制备方法，通过控制投加顺序和投加剂量制备成该新型油性免疫佐剂，使其在使用时不区分弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂。

同时提供了该新型油性免疫佐剂在抗体制备过程中的应用，节省了免疫次数，缩短了抗体的制备周期。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供了一种新型油性免疫佐剂及其制备方法，包括弗氏不完全佐剂、多聚赖氨酸、香菇多糖和Poly r(c)，弗氏不完全佐剂佐剂可以用于协助抗原刺激机体产生抗体应答，多聚赖氨酸用于抑制细菌的生长，有利于抗原刺激机体产生抗原应答，香菇多糖用于调节机体的免疫功能，刺激抗体的形成，poly r(C)用于诱导机体产生抗体、调节机体免疫功能。该新型油性免疫佐剂制备时，首先在弗氏不完全佐剂的基础上加入Poly r(c)，其次再加入多聚赖氨酸，最后再加入香菇多糖，形成该新型油性免疫佐剂，弗氏不完全佐剂包括液体石蜡和羊毛脂。

优选地，一种新型油性免疫佐剂的各组分配比为：

优选地，提供了该新型油性免疫佐剂的制备过程，步骤为：

第一步，在37℃的环境中，使用液体石蜡和羊毛脂配置成弗氏不完全佐剂；

第二步，将第一步配置的弗氏不完全佐剂充分混合，加入Poly r(c)，并充分混合；

第三步，向第二步充分混合后的溶液中加入多聚赖氨酸，充分混合；

第四步，向第三步充分混合后的溶液中加入香菇多糖，充分混合后制备成新型油性免疫佐剂。

优选地，一种新型油性免疫佐剂的各组分配比为：