[发明专利]一种提高脐带间充质干细胞回收率的消化方法

说明书

本发明公开了一种提高脐带间充质干细胞回收率的消化方法，其特征在于：包括以下步骤：向含有消化剂的脐带间充质干细胞混合液内加入含有ALB的生理盐水终止胰酶消化作用。本发明的有益效果是：（1）本发明提高了消化后脐带间充质干细胞的回收率。（2）本发明降低了脐带间充质干细胞的培养成本，有利于脐带间充质干细胞大量培养，以满足更大需求的科学研究等。

技术领域

本发明涉及脐带间充质干细胞领域，尤其涉及一种提高脐带间充质干细胞回收率的消化方法。

背景技术

脐带间充质干细胞(Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells，UCMSCs)一般指来自于新生儿脐带华氏通胶的一种多功能干细胞，UCMSCs可以自我更新、复制和多个方向进行分化，在软骨、肌肉、韧带、神经、肝脏、内皮和心肌等疾病方面具有广阔的临床应用前景。

UCMSCs在分离和培养过程中，一般会经过脐带剪切、双酶消化、贴壁培养、胰酶消化和终止、收集和传代等操作过程，而间充质干细胞在原代培养获得后进行的主要工作就是传代和培养。因间充质干细胞属贴壁生长细胞，在进行传代和培养工作过程中，需要使用胰酶将贴壁的干细胞从培养瓶壁消化脱落，因细胞表面有许多蛋白分子，为避免过度消化对细胞造成形态结构或功能的改变，需要在培养瓶内加入胰酶消化一段时间后添加终止液以终止酶消化作用。

在实际实验操作过程中，通常所用的终止液是添加了胰酶抑制剂的完全培养基，这一方法操作简便，终止效果良好，为绝大多数高校、科研院所及医院等实验室采用。但是，进口完全培养基价格高昂，实验条件下少量使用尚可接受，对于大量培养干细胞用于临床研究等方面时，培养基成本成为不可避免的问题。此外，我们在实践中发现，使用添加胰酶抑制剂的完全培养基终止酶消化作用时，因一次性消化数量较多，消化后的干细胞在操作过程中会出现重新贴壁的现象，这使得回收的干细胞有一定数量的减少，造成浪费。

发明内容

为了解决上述背景技术中提出的问题，本发明提供了一种提高脐带间充质干细胞回收率的消化方法，包括以下步骤：向含有消化剂的脐带间充质干细胞混合液内加入含有ALB的生理盐水终止胰酶消化作用。

优选的，所述消化剂为质量体积分数为0.25%的胰酶PBS溶液。

优选的，所述含有ALB的生理盐水为质量体积比5mg/ml-8mg/ml的ALB生理盐水。

优选的，所使用的PBS溶液的pH值为7.2-7.4。

优选的，所使用的生理盐水的质量分数为0.9%。

本发明的有益效果是：

1)本发明提高了消化后脐带间充质干细胞的回收率。2)本发明降低了脐带间充质干细胞的培养成本，有利于脐带间充质干细胞大量培养，以满足更大需求的科学研究等。

附图说明

图1为本发明A组间充质干细胞抽样流式检测结果图。

图2为本发明B组间充质干细胞抽样流式检测结果图。

图3为图1和图2中每个图表的放大样例图。

具体实施方式

下面对本发明的实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。

英文缩写解释说明：

ALB：白蛋白；

PBS：磷酸缓冲盐溶液。

实施例

1、主要仪器、试剂、耗材