[发明专利]稀释生物样品成分的分析方法

说明书

本发明涉及稀释生物样品成分的分析方法。特别地，本发明提供一种生物样品成分的分析方法，该方法能够对从手指等采集的微量且未知量的全血样品中的血浆成分和血细胞成分的任意成分进行简单且准确的定量和计算。本发明是对微量血液中的生物样品成分进行分析的方法，其特征在于，分析加入所述血液的稀释缓冲液以及该稀释缓冲液中含有的内标物和/或外标物，计算稀释率，从而对所述血液中的血浆或血清成分中的生物成分进行分析。

本申请是申请日为2015年7月6日，申请号为201580051060.9，发明名称为“稀释生物样品成分的分析方法”的申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种对血液等生物样品中的分析物进行测定的方法，其是用具有特定成分的缓冲液稀释生物样品，由稀释样品中的混合溶液对血浆样品成分或酶活性进行分析的测定方法。

本发明还涉及一种微量生物样品成分的分析方法与血细胞的计数测定，其用规定缓冲液稀释未定量的微量血液等生物样品，由稀释的样品混合溶液对血浆样品成分的定量和酶活性进行分析。

背景技术

患者或受试者为了各种疾病的诊断、治疗效果的判断和健康管理，需要前往医疗机构或体检场所，从静脉采集血液进行检查。但是，为获知检查结果需要长时间等待。此外，存在着为检查而需要请假半天以上工作时间的问题。

作为可在任意时间任意地点都可以进行血液检查的方法，报道了用加入内标物的缓冲液稀释微量血液，由内标物的稀释倍数来对稀释血浆中未知量的存在成分量进行定量的方法(例如，参见专利文献1)。

具体而言，作为用规定缓冲液稀释微量血液，由稀释的样品混合溶液对血浆样品成分的定量和酶活性进行分析的方法，已知使用甘油-3-磷酸或甘油作为内标物的方法(例如，参见专利文献2)。

此外，已知血细胞成分的计数测定中作为其稀释内标物而使用酪胺的方法(例如，参见专利文献3)。

另一方面，作为由微量血液进行检查的方法，报道了作为采集血液的方法而使用滤纸的方法(例如，参见专利文献4)。

通过利用微量血液，无需选择时间与场所就可以进行检查，期待着能够有助于出现症状前发现或保持健康。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2003-161729号公报

专利文献2：日本特开2006-322829号公报

专利文献3：日本特开2011-112451号公报

专利文献4：日本特开平10-104226号公报

发明内容

发明所要解决的问题

但是，上述现有的稀释率计算方法中，作为血浆的稀释内标物利用甘油-3-磷酸，但被存在于生物内的酶碱性磷酸酶水解，生成甘油。因此，如果添加血液后的保存时间长、或者温度高，则不能得到准确的血液稀释率。由此，对原血浆中的生物成分或酶活性的测定值的可靠性降低。为解决这种状况而需要在现有方法中添加酶抑制剂EDTA。但是，该抑制剂的添加并不能完全抑制酶，因此需要进一步添加作为生成物抑制剂的磷酸，由于这两种物质的添加而使天冬氨酸转氨酶或谷丙转氨酶的活性下降。其结果是需要过度添加这些酶的活性剂磷酸吡哆醛。

作为解决这些问题的内标物，可将胆碱等阳离子带电的物质作为内标利用，但观察到吸附到塑料容器上，存在着不适于长时间保存的问题。对于这些物质，作为〔专利文献2〕提出了申请，但分子内有芳香环，因而疏水性高，如果长期保存于塑料容器中则发生吸附，存在着不能准确求出血液的稀释倍数的问题。本发明发现了乙醇胺等化合物作为分子内没有芳香环、渗透到血细胞内的物质是有效的。这些物质基本上不存在于血液中，而且是稳定的化合物。此外，能够溶于内标液的缓冲液中，不会因长期保存而吸附到塑料容器上。