[发明专利]与猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性结合的多肽序列及其应用

说明书

本发明公开了与猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，所述的多肽序列为DYWWQSWE。本发明基于猪圆环病毒2型Cap蛋白的晶体结构(PDB ID:3R0R)，通过分子对接虚拟筛选技术，获得一条与猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性结合的多肽序列，其多肽序列为DYWWQSWE，即L6‑11。固相合成L6‑11，并与猪圆环病毒2型Cap蛋白进行亲和力鉴定，L6‑11序列与人工表达的PCV2 Cap蛋白之间相互作用的平衡解离常数K_D为1.03×10^‑8M，即10.3nM，说明亲和力较好。本发明设计而成的L6‑11序列与人工表达PCV2 Cap蛋白、人工接种PCV2均可以结合，与其它病毒蛋白均不发生交叉性反应，特异性较好。

技术领域

本发明涉及与猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于多肽设计及靶标蛋白分离纯化领域。

背景技术

随着科技的不断发展，基于结构的分子对接虚拟筛选技术，作为一种亲和肽理性设计和筛选的重要手段，已成为近年来研究的热点。该方法主要是借助于计算机软件的快速运算实现小分子多肽在靶标蛋白活性位点上的逐一对接，这些小分子多肽来自于事先准备好的虚拟肽库，然后经过连续优化靶标蛋白的空间构象、氨基酸残基侧链等方面，找到小分子多肽与靶标蛋白最优的结合构象，计算出小分子多肽与生物大分子蛋白相结合的方式与亲和力，并且对结果进行打分，根据打分结果挑选出最佳配体，然后将最佳配体进行体外实验验证和筛选。

猪圆环病毒2型(procine circovirus type 2，PCV2)是造成猪圆环病毒相关性系统疾病(PCV2-systemic disease，PCV2-SD)的首要病原，它常与其他病原混合感染引起猪的亚临床感染，对养猪业造成巨大的经济损失。PCV2为圆环病毒科圆环病毒属成员，是一种共价闭合、单股无囊膜的DNA病毒，基因组大小约为1.7Kb。病毒粒子为正二十面体的构象，直径约为17nm，是目前发现的最小动物病毒之一。PCV2基因组主要包含ORF1和ORF2两个开放阅读框，其中ORF2编码病毒的主要结构蛋白Cap，Cap蛋白由233～234个氨基酸编码，该蛋白不仅可以自我组装成病毒样颗粒而且也是所有PCV2疫苗的主要成分，可以诱导机体产生高滴度的中和抗体水平。因此Cap蛋白目前成为许多科研工作者的主要研究对象。

发明内容

本发明借助于计算机辅助设计，在猪圆环病毒2型Cap蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为DYWWQSWE，即L6-11。固相合成L6-11，利用表达纯化的PCV2Cap蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振(Localized Surface Plasmon Resonance，LSPR)试验，结果表明，L6-11多肽能够与PCV2Cap蛋白有良好的结合能力，由此证明，借助本发明设计而成的多肽，可用于对猪圆环病毒2型抗原进行快速检测和分离纯化。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

与猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性结合的多肽序列，所述的多肽序列为DYWWQSWE。

所述的与猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性结合的多肽序列，包括以所述的多肽序列为核心，任何对该多肽序列所进行的相应调整或修饰；修饰材料包括但不局限于纳米材料、荧光材料、酶类、生物素及特定的蛋白质。

一种所述的多肽序列在猪圆环病毒2型Cap蛋白的快速检测、纯化和疫苗中的应用。

所述快速检测包括但不局限于酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。

一种所述的多肽序列在猪圆环病毒2型抗原定量和定性的快速检测中的应用。

本发明的有益效果：