[发明专利]一种检测吡虫啉的试纸条、吡虫啉半抗原的制备方法及检测吡虫啉残留的方法

权利要求书

1.一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，包括底板，底板的上设有样品吸收垫和吸水垫；底板上还设有结合物释放垫，结合物释放垫的一部分位于样品吸收垫与底板之间；被样品吸收垫覆盖，另一部分不被样品吸收垫覆盖且位于样品吸收垫与吸水垫之间；在结合物释放垫与吸水垫之间设有反应膜，反应膜上具有包被有吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，结合物释放垫上设有吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物。

2.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，所述吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物是由吡虫啉半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白中任意一种。

3.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，所述吡虫啉单克隆抗体是以吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由吡虫啉单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得。

4.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，检测线的制备包括以下过程：

步骤1，将吡虫啉半抗原与载体蛋白偶联，得到吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物；

步骤2，将吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线。

5.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，质控线的制备包括以下过程：

步骤1，提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；

步骤2：将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线。

6.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，制备上述吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物包括以下过程：

步骤1，制备吡虫啉单克隆抗体：用吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到吡虫啉单克隆杂交瘤细胞株；

步骤2，用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

步骤3，将吡虫啉单克隆抗体加入胶体金中，得到吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物。

7.根据权利要求5所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，上述样品吸收垫用含0.5%牛血清白蛋白、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h，牛血清白蛋白按体积分数计算。

8.一种吡虫啉半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

取6-氯-3-（氯甲基）吡啶-2-胺0.5g，加二甲基亚砜80ml溶解，加氢化钠0.27g，搅拌，加2-硝基亚氨基咪唑烷0.41g，油浴加热，90℃搅拌反应8h；

停止反应，冷却至室温，加蒸馏水100ml，加乙酸乙酯80ml×3，萃取三次。合并有机相，蒸干，上硅胶柱，二氯甲烷/甲醇（v/v，10/1）洗脱分离，得到氨基吡虫啉半抗原产物。

9.根据权利要求8所述的一种吡虫啉半抗原的制备方法，其特征在于，吡虫啉半抗原的分子结构式为：

10.一种检测吡虫啉残留的方法，其特征在于，包括以下步骤:

S1:样本处理；

S2:利用权利要求1~7任一项所述的检测吡虫啉的试纸条进行检测。