[发明专利]一种人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法

说明书

本发明公开了一种新的人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，将Luciferase‑GFP基因转导进人脑胶质瘤，并筛选出感染后的人脑胶质瘤阳性细胞，配制形成细胞悬液；小鼠麻醉后将其头部固定，将消毒后的进样针吸取细胞悬液后置于小鼠颅骨上方手术区域；对小鼠颅骨手术区域钻孔后形成注射孔；移动进样针至注射孔中，并深入至脑组织中缓慢注入细胞悬液；注射完细胞悬液后提出进样针，将伤口消毒后粘合；待细胞悬液注入一周后对肿瘤部位进行显像观察，并对所构建的人脑胶质瘤原位模型进行评估。本发明采用更接近人类脑胶质瘤原发病灶生长环境下构建人脑胶质瘤模型，可以有效评估肿瘤生长，方便连续观测并获取研究所需要的重要数据。

技术领域

本发明涉及脑胶质瘤发病及复发机制，开发新的治疗药物研究等技术领域，具体涉及一种人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法。

背景技术

脑胶质瘤是因为大脑和脊髓胶质细胞癌变所产生的最常见的原发性颅脑恶性肿瘤，其发病率约占颅内肿瘤的35.2％-61.0％，由成胶质细胞衍化而来，具有发病率高、复发率高、死亡率高以及治愈率低的特点。

目前，比较常见的技术是在小鼠皮下建立皮下肿瘤模型，现有皮下肿瘤模型的评估方式包括游标卡尺测量及取瘤测量，第一种方法可实现连续观测，但是误差较大，过程缺乏有效的记录方法；第二种方法不可连续观察。由于在皮下进行人脑胶质瘤模型的构建远离了原发病灶的生长环境，因此，所构建的肿瘤模型不利于对人脑胶质瘤增殖、转移及治疗等方面的研究。

发明内容

本发明的目的在于在更接近人类脑胶质瘤原发病灶生长环境下构建人脑胶质瘤模型，可以有效评估肿瘤生长，方便连续观测并获取研究所需要的重要数据，为此，本发明提供了一种人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法。

一种人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，所述方法包括如下步骤：

步骤1，将Luciferase-GFP基因转导进人脑胶质瘤，并筛选出感染后的人脑胶质瘤阳性细胞，配制形成细胞悬液；

步骤2，小鼠麻醉后将其头部固定，将消毒后的进样针吸取细胞悬液后置于小鼠颅骨上方手术区域；

步骤3，对小鼠颅骨手术区域钻孔后形成注射孔；

步骤4，移动进样针至注射孔中，并深入至脑组织中缓慢注入细胞悬液；

步骤5，注射完细胞悬液后提出进样针，将伤口消毒后粘合；

步骤6，待细胞悬液注入一周后对肿瘤部位进行显像观察，并对所构建的人脑胶质瘤原位模型进行评估。

在将Luciferase-GFP基因转导进人脑胶质瘤之前需要对小鼠禁食不禁水，在740nm的红外光下检测小鼠体内食物状况，直至小鼠体内食物完全排空为止。

所述步骤1中制备GFP人脑胶质瘤阳性细胞的具体方法是：

步骤1.1、将人脑胶质瘤细胞接种于细胞培养皿中，5x10⁵个/皿；

步骤1.2、采用高唐4DMEM培养基(含10％的胎牛血清)培养M-PG-13-GL细胞，收集产生的病毒5ml，采用2000g离心5min，留上清液，并在上清液中加入基因转染增强剂，吸弃培养基后，加入上述所产生的病毒5ml感染人脑胶质瘤细胞；

步骤1.3、重复上述过程制作U87-GL等人源的细胞株或原代胶质瘤细胞，且连续感染人脑胶质瘤细胞至少3天；

步骤1.4、相应培养基扩增已转入GFP的人脑胶质瘤细胞；

步骤1.5、采用流式分选出阳性细胞，制得GFP人脑胶质瘤细胞。