[发明专利]检测鲤浮肿病毒的试剂盒及其检验方法

说明书

本发明提供一种检测鲤浮肿病毒的试剂盒，其适用于聚合酶连锁反应，试剂盒包含引物对，引物对包含如序列标记编号1所示的正向引物和序列标记编号2所示的反向引物。本发明另提供一种利用上述试剂盒检测鲤浮肿病毒的检验方法。由此，能够灵敏、特异性好、快速且操作简单方便的对鲤浮肿病毒进行检测。

技术领域

本发明涉及一种核酸的测定和检验方法，特别是涉及一种利用聚合酶连锁反应检测鲤浮肿病毒的试剂盒及其检验方法。

背景技术

鲤浮肿病毒(Carp edema virus，CEV)为锦鲤睡眠病(Koi sleepy disease,KSD)的致病原，其隶属于痘病毒科(Poxviridae)。锦鲤睡眠病是一种表现为典型昏睡行为的新兴传染病，临床症状主要表现为极度嗜睡、眼睛凹陷、全身水肿、皮肤和鳍上分布着厚厚的粘液，以及鳃增生和坏死导致呼吸困难和缺氧，其死亡率高达80％至100％。

锦鲤睡眠病的发病温度较广，7℃至25℃的条件下均可发病。鲤科鱼类感染鲤浮肿病毒后，所出现的临床症状和锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease,KHVD)类似，例如表现为昏睡、鳃溃疡、眼球凹陷、皮肤损伤等。目前，锦鲤睡眠病对欧洲鲤科鱼类造成巨大损失，引起世界动物卫生组织的关注。在我国，也从河南、重庆、云南等地的锦鲤等鲤科鱼类检测到鲤浮肿病毒，显示鲤浮肿病毒已在我国鲤科鱼类养殖体系流行，并有进一步扩大传播的趋势，这将对我国锦鲤等观赏鱼进出口贸易和国内鲤科鱼类造成极大影响。然而，由于世界动物卫生组织(World Organisation for Animal Health,OIE)和亚太区水产联盟(Network of Aquaculture Centres in Asia-Pacific,NACA)等动物卫生组织没有推荐检测鲤浮肿病毒相应的技术规范，且文献报导相对有限，成为鲤浮肿病毒实验室检测和防控的瓶颈。

因此，开发快速、方便及准确诊断鲤浮肿病毒的检验方法，以方便锦鲤睡眠病的现场或实验室检测至为关键。

发明内容

有鉴于此，本发明的一目的是在提供一种检测鲤浮肿病毒的试剂盒及其检测方法，可以快速且特异性的从待测样本中检测鲤浮肿病毒。

本发明的一方案是提供一种检测鲤浮肿病毒的试剂盒，包含一引物对，所述引物对包含一序列标记编号1所示的正向引物以及一序列标记编号2所示的反向引物。

依据前述的检测鲤浮肿病毒的试剂盒，可进一步包含一接样环组件，用以将一待测样本转移至一试验管中。

依据前述的检测鲤浮肿病毒的试剂盒，可进一步包含一阳性对照组核酸干粉。

依据前述的检测鲤浮肿病毒的试剂盒，可进一步包含一如序列标记编号3所示的萤光探针。

本发明的另一方案是在提供一种检测鲤浮肿病毒的检验方法，包含以下步骤。提供一待测样本作为一模板。将所述模板以前段所述的检测鲤浮肿病毒的试剂盒进行聚合酶连锁反应，以获得一聚合酶连锁反应产物，而所述检测鲤浮肿病毒的试剂盒包含一引物对，所述引物对包含序列标记编号1所示的正向引物以及序列标记编号2所示的反向引物。最后检测所述聚合酶连锁反应产物的分子量大小是否为80bp。

依据前述的检测鲤浮肿病毒的检验方法，其中，所述聚合酶连锁反应产物可具有如序列标记编号4所示的序列。

依据前述的检测鲤浮肿病毒的检验方法，其中，检测所述聚合酶连锁反应产物可通过胶体电泳系统进行。

本发明的又一方案是提供一种检测鲤浮肿病毒的检验方法，包含以下步骤。提供一待测样本作为一模板。将所述模板以前段所述的检测鲤浮肿病毒的试剂盒进行一萤光探针式聚合酶连锁反应，所述检测鲤浮肿病毒的试剂盒包含一引物对和一萤光探针，所述引物对包含序列标记编号1所示的正向引物和序列标记编号2所示的反向引物，所述萤光探针具有如序列标记编号3所示的序列。最后检测是否具有一萤光信号值。