[发明专利]一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法及其在医药研究中的应用

权利要求书

1.一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法，其特征在于，由以下步骤组成：

以含胎牛血清的RPMI-1640培养基培养肺癌细胞，所述肺癌细胞的密度达到50％-65％，用恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基初诱导培养至密度达到75％-85％，传代并用恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基进行再诱导培养至所述肺癌细胞正常生长，得到第一诱导细胞；

传代所述第一诱导细胞后用恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol/L的培养基进行第一冲击诱导培养，再以恩曲替尼药液浓度为0.45-0.6μmol/L的培养基进行第一恢复培养至细胞稳定生长并传代，再以恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol/L的培养基进行冲击诱导至细胞稳定生长，得到第一冲击细胞；

用恩曲替尼药液浓度为3.6-4.5μmol/L的培养基对所述第一冲击细胞进行第二冲击诱导培养，再以恩曲替尼药液浓度为1.8-2.4μmol/L的培养基进行第二恢复培养至细胞稳定生长并传代，再以恩曲替尼药液浓度为3.6-4.5μmol/L的培养基进行冲击诱导至细胞稳定生长，得到第二冲击细胞；

用恩曲替尼药液浓度为9.5-11.8μmol/L的培养基对所述第二冲击细胞进行第三冲击诱导培养，再以恩曲替尼药液浓度为3.6-4.5μmol/L的培养基进行第三恢复培养至细胞稳定生长并传代，再以恩曲替尼药液浓度为9.5-11.8μmol/L的培养基进行冲击诱导至细胞稳定生长，得到第三冲击细胞；

用恩曲替尼药液浓度为14.2-15.5μmol/L的培养基对所述第三冲击细胞进行第四冲击诱导培养，再以恩曲替尼药液浓度为9.5-11.8μmol/L的培养基进行第三恢复培养至细胞稳定生长并传代，再以恩曲替尼药液浓度为14.2-15.5μmol/L的培养基进行冲击诱导至细胞稳定生长，得到第四冲击细胞；

用恩曲替尼药液浓度为28.8-30.6μmol/L的培养基对所述第四冲击细胞进行终冲击诱导培养，再以恩曲替尼药液浓度为14.2-15.5μmol/L的培养基进行终恢复培养至细胞稳定生长并传代，再以恩曲替尼药液浓度为28.8-30.6μmol/L的培养基进行冲击诱导至稳定生长并传代，得到恩曲替尼耐药的肺癌细胞；

其中，所述肺癌细胞为H3122。

2.根据权利要求1所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法，其特征在于，所述肺癌细胞处于对数生长期。

3.根据权利要求1所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法，其特征在于，所述初诱导培养和所述再诱导培养的时间均为22-27h。

4.根据权利要求1所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法，其特征在于，所述第一冲击诱导、所述第二冲击诱导、所述第三冲击诱导、所述第四冲击诱导和所述终冲击诱导的时间均为10-15h。

5.根据权利要求1所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法，其特征在于，所述第一恢复培养、所述第二恢复培养、所述第三恢复培养、所述第四恢复培养和所述终恢复培养的时间均为90-150h。

6.根据权利要求1所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法，其特征在于，所述培养基为RPMI-1640培养基。

7.根据权利要求6所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法，其特征在于，所述RPMI-1640培养基含有8％-13％的胎牛血清。

8.如权利要求1-7任一项所述的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法获得的恩曲替尼耐药的肺癌细胞在医药研究中的应用。