[发明专利]白色念珠菌适用性试验菌株及其制备方法

说明书

本发明属于药品微生物学检测方面的质量控制领域，特别涉及一种白色念珠菌适用性试验菌株及其制备方法。白色念珠菌适用性试验菌株仅包含一定量的白色念珠菌。本发明均匀性、稳定性符合适用性试验菌株要求，菌株所含菌数在适用性试验标准要求范围内，最大程度满足药品微生物检测过程中适用性试验、促生长试验等需要，样品的制备方法，工艺简单，成功率高。

技术领域

本发明属于微生物学检测方面的质量控制领域，特别涉及一种白色念珠菌适用性试验菌株及其制备方法。

背景技术

介于药品的特殊性，药品微生物学检验领域的非常特殊，要求每次检测之前培养基等供试品均需进行适用性检查，对试验用菌株有规定的浓度范围要求。目前已有的纯菌株大多数未进行定量，仅可供定性使用，仅有少数的定量菌株。对于该类定量菌株，均匀性和稳定性尤为重要，现有的定量菌株存在稳定性差，且菌含量较高，无法满足试验要求，运输条件要求较高等问题。

白色念珠菌是一种真菌，通常存在于正常人口腔、上呼吸道、肠道等部位，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式(芽生菌丝相)侵入细胞引起疾病。如果制备的白色念珠菌样品中，白色念珠菌易发生变化(繁殖和死亡等)，就会导致样品的保存期短，样品的均匀性和稳定性差。因此，综合考虑细菌的生化特性，选取性质相对稳定的白色念珠菌对保证样品的均匀性和稳定性十分重要。白色念珠菌样品制备的工艺技术要求比较高，并且样品的均匀性和稳定性与冻干的菌种、冻干的工艺条件、冻干保护剂的使用、再水化的介质等均有密切的关系。

药品中白色念珠菌指标，直接影响药品的卫生质量与安全。因此，制备均匀性与稳定性俱佳的白色念珠菌适用性试验菌株，可以避免致病风险。如果药品中存在白色念珠菌，极易对患者造成感染等，直接威胁患者的生命。白色念珠菌检验的随意性和不确定性，真实地反映检测实验室的能力，这对提高实验室质量控制水平，保障药品安全，甚至打破国际贸易壁垒、提高我国药品国际竞争力都具有特殊重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种满足药品微生物检测过程中适用性试验要求的具有一定含量范围的白色念珠菌适用性试验菌株；同时，克服白色念珠菌适用性试验菌株中总的活的细菌数目在运输、储存和测试等过程中菌落数都可发生变化的问题，本发明的另一个目的是提供该适用性试验菌株的制备方法，工艺简单，成功率高。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：白色念珠菌适用性试验菌株，其特征是：仅包含一种目标菌：白色念珠菌，目标菌的目标浓度为500～2000CFU/支，每支装有0.2g的冻干粉。

所述样品属药品检查中适用性试验用菌株，应用于药品微生物检测过程中适用性试验。

所述适用性试验菌株以海藻糖、明胶和无菌水为基质，其中海藻糖体积分数为10％、明胶体积分数为1％。

白色念珠菌适用性试验菌株的制备方法，其特征是：包括样品添加菌株的配制、冻干保护剂的配制、样品冻干、样品的均匀性和稳定性试验、样品定值五个步骤，其中样品冻干过程为：菌株复苏传代—增菌—菌液分装—菌悬液配制—冻干和包装—储存，具体过程为：

(1)菌株复苏传代

将标准菌株接种到营养琼脂斜面培养基中，在30～35℃下使其复苏和生长，并对复苏的菌株进行鉴定；

(2)增菌

目标菌培养至对数生长期末，从斜面刮取菌落，加到10mL的冻干保护剂中制成菌液；

(3)菌液分装

将上一过程得到的菌液与冻干保护剂混合，配制100mL菌液，将此菌液置于磁力搅拌器上不断搅拌下平均分装到菌液储存瓶中，每瓶5mL，共20瓶，置于液氮中保存备用。

(4)菌悬液配制