[发明专利]一种快速检测环孢霉素的时间分辨荧光免疫层析试剂条

说明书

本发明提出了一种快速检测环孢霉素的时间分辨荧光免疫层析试剂条，其包括检测卡和可选择的荧光免疫定量分析仪，所述检测卡包括样品垫、结合垫、具有检测线和质控线的检测垫、吸收垫以及背衬板，所述结合垫喷涂有纳米微球时间分辨荧光‑环孢霉素探针，所述纳米微球时间分辨荧光‑环孢霉素探针由纳米荧光微球和环孢霉素单克隆抗体制备，所述检测线由环孢霉素蛋白衍生物喷涂制备，所述质控线由羊抗鼠IgG抗体喷涂制备，所述环孢霉素抗体为鼠源性抗体。本发明检测灵敏度高，检测范围广，检测稳定可靠，操作简便易行，仅需5分钟就能获得准确、可靠的测定结果，拥有良好的商业化应用前景。

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及一种快速检测环孢霉素的时间分辨荧光免疫层析试剂条。

背景技术

环孢霉素A(Cyclosporine A，CsA)作为一种免疫抑制剂在移植排异治疗中发挥了重大作用，在全球范围内推动了器官移植术的发展。尽管CsA的使用往往伴有多种不良反应，至今全球仍有数十万例患者使用CsA抑制移植后的排异反应。

由于不同患者对CsA的吸收和代谢往往表现出很大的个体差异，即使使用相同的药物剂量，不同患者的CsA血药浓度也常差异显著；由于CsA的肝、肾毒性及其狭窄的治疗剂量范围，CsA的药效与药毒均与血药浓度密切相关，因此，准确检测CsA的血药浓度对于控制CsA 的药毒性和发挥CsA的抗排斥作用均具有重要参考价值。

目前，检测CsA血药浓度的方法主要有高效液相-质谱联用(HPLC-MS)、微粒子酶免疫测定(MEIA)、化学发光微粒子免疫测定(CMIA)以及酶联免疫吸附法(ELISA)等。其中HPLC-MS法测定血药浓度准确、灵敏，但其操作繁琐，检测时间长，检测成本高，需要昂贵设备，主要用于科研领域或作为一种参考方法。MEIA和CMIA是目前常用的检测方法，其检测自动化程度高，检测结果准确，但试剂价格昂贵，需要使用配套的大型仪器。酶联免疫吸附法则存在检测时间长，操作复杂，重复性差等缺点。时间分辨荧光免疫层析法具有操作简单、快速、无需大型设备等特点、如能开发出时间分辨荧光免疫层析法试剂用于检测全血中环孢霉素A，将为广大应用环孢霉素A作为免疫抑制剂的移植患者实现在采样现场即刻进行分析，省去标本在实验室检验时的复杂处理程序，以便快速得到检验结果，从而节省大量往返医院及等待结果时间。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供一种快速检测环孢霉素的时间分辨荧光免疫层析试剂条及其制备方法，制备方法简单，检测灵敏度高，检测范围广，检测稳定可靠，操作简便易行。

本发明提供一种快速检测环孢霉素的时间分辨荧光免疫层析试剂条，其包括检测卡和可选择的荧光免疫定量分析仪，所述检测卡包括样品垫、结合垫、具有检测线和质控线的检测垫、吸收垫以及背衬板，所述结合垫喷涂有纳米微球时间分辨荧光-环孢霉素探针，所述纳米微球时间分辨荧光-环孢霉素探针由纳米荧光微球和环孢霉素单克隆抗体制备，所述检测线由环孢霉素蛋白衍生物喷涂制备，所述质控线由羊抗鼠IgG抗体喷涂制备，所述环孢霉素抗体为鼠源性抗体。

作为本发明进一步的改进，所述检测垫为硝酸纤维素膜且为孔径5～12μm的多孔样结构膜；所述样品垫、结合垫的材质为玻璃纤维素膜或无纺布，所述吸收垫的材质为吸水滤纸。

本发明进一步保护一种快速检测环孢霉素的时间分辨荧光免疫层析试剂条的制备方法，包括以下的步骤：

S1.利用羧基化聚苯乙烯纳米微球，制备纳米荧光微球；所述纳米荧光微球中，稀土元素离子、β-二酮体类螯合物和荧光增强协同剂的摩尔比为1.2∶3∶3；

S2.利用步骤S1制备的纳米荧光微球和环孢霉素单克隆抗体，制备纳米微球时间分辨荧光-环孢霉素探针；

S3.利用步骤S2制备的纳米微球时间分辨荧光-环孢霉素探针喷涂在玻纤膜上得到纳米荧光微球标记的环孢霉素单克隆抗体结合垫；