[发明专利]检测BCMA嵌合抗原受体基因的PCR引物组合及应用

权利要求书

1.一种用于检测BCMA(B细胞成熟抗原)嵌合抗原受体基因的PCR的引物组合，其特征在于：所述引物组合包括特异检测BCMA嵌合抗原受体基因的引物对；

所述特异检测BCMA嵌合抗原受体基因的引物对的上游引物如SEQ ID No.1所示，下游引物如SEQ ID No.2所示。

2.如权利要求1所述的引物组合，其特征在于：所述引物组合还包括特异检测内参基因Actin的引物对；

更优选的，所述特异检测内参基因的引物对的上游引物如SEQ ID No.4所示，下游引物如SEQ ID No.5所示。

3.如权利要求1或2所述的引物组合，其特征在于：所述引物组合还包括特异检测BCMA嵌合抗原受体基因的探针；优选的，所述特异检测BCMA嵌合抗原受体基因的探针的序列为SEQ ID No.3或其互补序列；

和/或，所述引物组合还包括特异检测内参基因Actin的探针；优选的，所述特异检测内参基因Actin的探针的序列为SEQ ID No.6或其互补序列；

优选的，所述探针为Taqman探针；

更优选的，所述探针的5’端使用报告荧光基团FAM、HEX、Texas Red或CY5进行修饰，所述探针的3’端使用淬灭基团BHQ1、BHQ2、BHQ3、或TAMRA进行修饰。

4.权利要求1—3中任一所述的引物组合在检测BCMA嵌合抗原受体基因中的应用，优选的，所述应用为检测细胞中BCMA嵌合抗原受体基因的表达量或拷贝数。

5.权利要求1—3中任一所述的引物组合在检测表达BCMA嵌合抗原受体的细胞中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述表达BCMA嵌合抗原受体的细胞为靶向BCMA的CAR-T细胞。

7.权利要求1—3中任一所述的引物组合在制备基于BCMA靶点的细胞免疫疗法的产品中的用途，其特征在于：所述产品用于检测细胞中BCMA嵌合抗原受体的表达量或筛选BCMA嵌合抗原受体阳性的细胞。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述细胞免疫疗法为CAR-T细胞免疫疗法。

9.一种用于检测BCMA嵌合抗原受体的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1—3中任一所述引物组合；优选的，所述试剂盒中还包括用于绘制标准曲线的系列标准品溶液、二甲基亚砜、含dNTP或含Mg²⁺的PCR反应预混液和DNA聚合酶。

10.一种检测离体细胞中BCMA嵌合抗原受体拷贝数的方法，包括如下步骤：

1)提取离体细胞中的DNA或RNA，获得DNA或所述RNA的cDNA；

2)使用权利要求1—3中任一所述的引物组合或权利要求9所述试剂盒，以步骤1)获得的所述DNA或cDNA为模板进行实时荧光定量PCR扩增，获得BCMA嵌合抗原受体的CT值；

3)根据BCMA嵌合抗原受体的CT值计算所述模板所在反应体系中BCMA嵌合抗原受体的起始拷贝数，并进一步计算得出离体细胞中BCMA嵌合抗原受体拷贝数。