[发明专利]一种利用核苷酸多态性分子遗传标记对鹅羽色进行选择的方法有效

专利信息
申请号: 201910153871.X 申请日: 2019-03-01
公开(公告)号: CN109777878B 公开(公告)日: 2022-03-18
发明(设计)人: 刘龙;许程;王倩;董飚;王健;耿拓宇;龚道清 申请(专利权)人: 扬州大学
主分类号: C12Q1/6888 分类号: C12Q1/6888
代理公司: 扬州苏中专利事务所(普通合伙) 32222 代理人: 沈志海
地址: 225009 *** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 利用 核苷酸 多态性 分子 遗传 标记 鹅羽色 进行 选择 方法
【权利要求书】:

1.一种利用单核苷酸多态性分子遗传标记对鹅羽色进行选择的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

(1)选定待测个体:从育种群体中挑选外形符合要求的个体;所述个体为朗德鹅个体;

(2)抽取血液并提取DNA:从检测个体的翅静脉中抽取0.1 mL的血液,利用DNA提取试剂盒,提取DNA模板;

(3)聚合酶链式反应及产物检测:利用提取的DNA作PCR中的模板和提供的PCR试剂盒进行PCR;取5 µL产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳,如呈现657 bp大小的单一条带,则将PCR产物进行测序检测;所述试剂盒由如下试剂组成:上游引物:5’-ACTCTGGGCATTGTAAGCCT-3’、下游引物:5’-AGCAGAACAACAAGGTGCAG-3’、2×Taq mix、水;

(4)测序并判定基因型:将PCR产物和引物进行测序,依据测序结果确定基因型;所述测序结果中,PCR产物中SNP的左右侧序列为:

GTCTTTTT(G/T)TATTATTATTTTTTAATAAAACAACCTGCCACATACCAAACAACCCCC(A/C)GGTTCC;

(5)依据基因型挑选合格的个体,凡是在多态性位点1具有GG基因型且在多态性位点2具有AA基因型的个体为白羽;在多态性位点1具有TT基因型且在多态性位点2具有CC基因型的个体为灰羽;在多态性位点1具有GT基因型且在多态性位点2具有AC基因型的个体为杂羽;其中,多态性位点1为上述SNP的左右侧序列中具有G/T突变的位点,多态性位点2为上述SNP的左右侧序列中具有A/C突变的位点;

(6)根据羽色性状的选育目标确定留用个体。

2.根据权利要求1所述的一种利用单核苷酸多态性分子遗传标记对鹅羽色进行选择的方法,其特征在于,步骤(3)中所述的PCR由如下体系组成:10µM的上游引物0.5μL、10µM的下游引物0.5μL、2×Taq mix 10μL、水8μL、200ng/μL的DNA1μL。

3.根据权利要求1所述的一种利用单核苷酸多态性分子遗传标记对鹅羽色进行选择的方法,其特征在于,步骤(3)中所述的PCR反应条件为:

(1)95℃预变性5分钟;

(2)95℃/30秒、56℃/30秒、72℃/30秒、循环35次;

(3)循环结束后72℃/5分钟;

(4)4℃保持至电泳。

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