[发明专利]一种脂肪颗粒组织冻存液及其配制方法和冻存方法

说明书

本发明公开了一种脂肪颗粒组织冻存液及其配制方法和冻存方法。所述的脂肪颗粒组织冻存液包括：海藻糖、羟基乙基淀粉、L‑抗坏血酸、白蛋白、人胰岛素、碱性成纤维生长因子以及基础培养基。该脂肪颗粒组织冻存液不含有二甲基亚砜和胎牛血清，对细胞没有毒性，不会使蛋白质变性，使用安全，可使得冻存后的脂肪颗粒组织具有更高的活力，提高了脂肪组织复苏后的存活率，能够使脂肪移植物保持较高的生物活性和组织结构，能够在临床上广泛应用。

技术领域

本发明是关于细胞生物学技术领域，特别是关于一种脂肪颗粒组织冻存液及其配制方法和冻存方法。

背景技术

自Billings和Neube于19世纪首先用自体脂肪填充软组织缺损至今已达一百多年。近年来随着脂肪抽吸技术进步和整形美容的蓬勃发展，自体脂肪移植已成为整形外科最重要的治疗手段之一。自体脂肪移植几乎可用于全身各个部位的软组织缺损填充，如皱纹、凹陷性瘢痕、隆胸和面部软组织填充等。

自体脂肪移植在整形外科应用越来越广泛，但其移植后成活率不高，常需少量、反复多次移植才能提高脂肪移植成活率，以达到满意效果。但反复、多次脂肪移植给患者造成了多次抽脂的痛苦、增加了风险及费用，同时也增加了医生的工作负担。如果能实现一次抽取足够量的脂肪并于体外长期冷冻储存，需要移植时将冷冻脂肪进行复苏，则能够避免多次脂肪组织抽取，从而做到“一次吸脂、多次使用”，减少了患者多次抽指造成的痛苦，降低了治疗费用，同时还减少医生的工作量，具有重要的临床意义。最早在1990年，Fournier首次提出了冷冻法保存脂肪可能性，认为冷冻脂肪移植后的效果与新鲜脂肪无明显差异。随后又有研究者提出，脂肪组织冷冻储存两年仍有活力并可用于移植，且是安全的，为长期冻存脂肪组织移植的安全性提供了有力的支持。

低温冷冻保存(-196℃)脂肪颗粒组织最大优点是脂肪细胞能长期保存而不丧失活性，其原因是因为细胞内一切新陈代谢过程中的化学反应被低温所抑制，当温度降到一定程度时，细胞内所有化学变化也就处于一种“暂停”状态而使细胞得以长期保存；低温保存的脂肪颗粒以一定方式复苏后，又具有存活能力。

但脂肪颗粒在冻存过程中容易受细胞内外未结冰溶液中高浓度电解质的损伤、细胞内水分结成冰晶的损伤，所以需要冷冻保护剂。二甲基亚砜(DMSO)具有膜通透性好和渗透性强等特点，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，是最常用冻存剂。但DMSO具有细胞毒性作用，与蛋白质疏水基团发生作用，导致蛋白质变性，具有肝肾毒性和血管毒性，DMSO应用存在潜在的致癌风险，使得DMSO作为冻存剂在临床应用中受到很大限制。另外，DMSO作为冻存剂常与胎牛血清(FBS)一起使用，保护细胞膜，提高复苏后的细胞活性，但FBS可能含有疯牛病病毒，在临床应用上存在潜在的风险。

因此，脂肪移植后为了达到脂肪移植物保持最好的生物活性和组织结构，仍然需要对脂肪颗粒冷冻保存技术进行改进。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种脂肪颗粒组织冻存液，其解决了现有脂肪颗粒组织冻存液具有毒性且存在潜在风险的问题，可使得冻存后的脂肪颗粒组织具有更高的活力，提高了脂肪组织复苏后的存活率，能够使脂肪移植物保持最好的生物活性和组织结构。

为实现上述目的，本发明提供了一种脂肪颗粒组织冻存液，所述脂肪颗粒组织冻存液包括：海藻糖、羟基乙基淀粉、L-抗坏血酸、白蛋白、人胰岛素、碱性成纤维生长因子以及基础培养基；其中，所述海藻糖的浓度为50-90g/L，所述羟基乙基淀粉的浓度为40-90g/L，所述L-抗坏血酸的浓度为32-80mg/L，所述白蛋白的浓度为30-70g/L，所述人胰岛素的浓度为10-30mg/L，所述碱性成纤维生长因子的浓度为10-30ug/L。