[发明专利]一种用于蛋白质组学分析的罗汉果叶片总蛋白质的提取方法在审
申请号: | 201910155319.4 | 申请日: | 2019-03-01 |
公开(公告)号: | CN109734771A | 公开(公告)日: | 2019-05-10 |
发明(设计)人: | 朱诚;胡铭周;杨慧;周莲;王秉 | 申请(专利权)人: | 浙江理工大学 |
主分类号: | C07K1/14 | 分类号: | C07K1/14 |
代理公司: | 杭州永航联科专利代理有限公司 33304 | 代理人: | 侯兰玉 |
地址: | 310018 浙江省杭州*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 罗汉果 叶片 总蛋白质 蛋白质组学 沉淀粉末 裂解溶液 沉淀 预处理 蛋白质裂解液 蛋白质提取液 蛋白质纯度 叶片蛋白质 高效提取 上层清液 生物领域 提取植物 盐类物质 叶片粉末 分析 传统的 多酚类 提取法 裂解 去除 下层 备用 保存 应用 | ||
1.一种用于蛋白质组学分析的罗汉果叶片总蛋白质的提取方法,其特征在于包括以下步骤:
S1:将经过预处理的罗汉果叶片粉末与蛋白质提取液混合,于-15~-25℃中静置,离心,取下层沉淀;所述蛋白质提取液为:每300ml蛋白质提取液中含有40-50ml 1Mtris-HCl,70-80ml甘油和5-7g聚乙烯吡咯烷酮;
S2:将所述沉淀经冷冻干燥后粉碎得到沉淀粉末,保存备用;
S3:将所述沉淀粉末与蛋白质裂解液混合,于-6~-1℃下裂解11-13h,得罗汉果叶片裂解溶液;
所述蛋白质裂解液的制备方法为:按质量比96:30-31:6-9:1-2将尿素、硫脲、3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐以及二硫苏糖醇混合均匀,加入双蒸水,于-15~-25℃保存备用;
S4:将所述罗汉果叶片裂解溶液离心,取上层清液,干燥即得罗汉果叶片总蛋白质。
2.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于,S1中,所述蛋白质提取液的加入量为每1g罗汉果叶片粉末添加2-4ml。
3.如权利要求1或2所述的提取方法,其特征在于,S1中,静置时间为10-14h;离心条件为:1-5℃,10000-14000r/min,20-40min。
4.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于,S1中,所述预处理为:将罗汉果叶片剪成碎片,加入液氮以及聚乙烯毗咯烷酮,研磨,得罗汉果叶片粉末。
5.如权利要求4所述的提取方法,其特征在于,预处理时,将罗汉果叶片研磨之后与超临界二氧化碳按质量比1:16-20混合,投入超临界萃取罐,萃取压力为18-22MPa,萃取温度为30-33℃,取出萃取脂类后的粉末与清水按质量比1:80-120混合,搅拌5-15min,加入摩尔浓度为0.4-0.6mol/L的碳酸氢钠溶液直至pH值为9.2-9.6,20-25℃下静置2-4h,清水洗至pH值为6.8-7.1,过滤,冷冻干燥,得罗汉果叶片粉末。
6.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于,S2中,在冷冻干燥之前将所述沉淀与质量分数为6-10%的氯化钠溶液按照质量比1:3-5混合,置于微波装置微波处理30-40s,微波功率为400-500W。
7.如权利要求1或6所述的提取方法,其特征在于,S2中,保存温度为-15~-25℃。
8.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于,S3中,所述蛋白质裂解液的加入量为每1g沉淀粉末添加1ml。
9.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于,S3中,所述双蒸水的加入量为每0.48g尿素1ml。
10.如权利要求1所述的提取方法,其特征在于,S4中,离心条件为:1-5℃,10000-14000r/min,28-32min。
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