[发明专利]一种石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒及其染色方法和应用

说明书

本发明公开了一种石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒及其染色方法和应用，该试剂盒包括如下组分：二甲苯、无水乙醇、PBS缓冲液、柠檬酸抗原修复液、胰酶、内源性过氧化物酶阻断剂、兔抗人IgG多克隆抗体、兔抗人IgA多克隆抗体、酶标羊抗兔第二抗体、DAB显色剂、过碘酸、硫酸、PAS染液、苏木素染色液、盐酸酒精，氨水酒精。本发明的试剂盒染色过程中简便快捷，可以用于在同一张切片上染色显示肾组织结构、免疫复合物沉积方式和部位。本发明的石蜡切片免疫组化套染PAS减少组织制备过程，染色步骤少，实验时间缩短，稳定性高，实验结果直观对比，所提供的信息量远远比传统单染高等优点。

技术领域

本发明属于免疫组织化学技术领域，具体涉及种石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒及其染色和应用。

背景技术

肾脏病的诊断金标准是“肾穿刺活检术”取得肾脏组织行病理检查，不同病理类型及损伤程度的治疗策略不同，因此，肾脏病理分期对临床治疗和预后具有重要意义。

在肾穿刺组织的病理诊断中，常规采用冰冻切片免疫荧光染色、石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色、过碘酸雪夫染色(PAS)、马松染色(Masson)、六胺银马松套染(PASM)以及电镜观察等，具体而言，石蜡切片HE染色用于观察肾组织的基本结构,分辨细胞种类；PAS染色可用于观察肾小球和肾小管基底膜以及系膜基质的多寡；Masson染色可显示基底膜及细胞外基质增多，用于观察肾间质纤维化及某些特殊蛋白沉积,如免疫复合物。冰冻切片免疫荧光染色用于检测沉积于肾组织内免疫球蛋白、补体、纤维蛋白以及病毒抗原等。借助电镜可观察肾脏超微结构改变,如肾小球基底膜厚度和结构、肾脏固有细胞形态、电子致密物及其沉积部位、特殊的纤维素样物质和病毒样颗粒等。上述染色结果再结合临床资料，最终确定临床肾脏病理分型。因此，穿刺获取的肾组织必须制备成冰冻切片、石蜡切片和电镜超薄切片，再进行各种染色以备观察。然而，因肾穿刺为有创性检查且穿刺医生技术精疏有别以及患者个体差异，获取肾组织材料往往较少，标本质量亦常不尽人意，难以做全上述各种检查；另外，超微电镜价格昂贵，很多单位尚未购置，难以做超微结构判读和诊断，增加了病理诊断的不确定性。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒及其染色方法，该试剂盒染色过程中简便快捷，可以用于在同一张切片上染色显示肾组织结构、免疫复合物沉积方式和部位。本发明的石蜡切片免疫组化套染PAS减少组织制备过程，染色步骤少，实验时间缩短，稳定性高，实验结果直观对比，所提供的信息量远远比传统单染高等优点，尤其适用于缺少电镜和荧光显微镜的基层单位开展肾活检染色技术。

本发明还提供一种石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒及其染色方法的应用。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明的所述的一种石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒，其特征在于，包括如下组分：二甲苯、无水乙醇、PBS缓冲液、柠檬酸抗原修复液、胰酶、内源性过氧化物酶阻断剂、兔抗人IgG多克隆抗体、兔抗人IgA多克隆抗体、酶标羊抗兔第二抗体、DAB显色剂、PAS染液、过碘酸、硫酸、苏木素染色液、盐酸酒精，氨水酒精。

本发明所述的石蜡切片免疫组化套染PAS试剂盒的染色方法，包括如下步骤：

(1)脱蜡至水：将组织制成石蜡切片，石蜡切片浸泡于二甲苯脱蜡缸中进行脱蜡，然后将切片浸泡在乙醇中；

(2)微波热修复抗原：将步骤(1)浸泡后的切片浸泡于柠檬酸抗原修复液中，微波加热，然后将切片取出，自然冷却至室温；

(3)胰酶修复抗原：将切片上组织滴加胰酶，孵育后进一步暴露抗原，再用PBS冲洗；

(4)内源性过氧化物酶阻断：冲洗后切片上组织滴加内源性过氧化物酶阻断剂室温孵育，再用PBS冲洗；

(5)孵育IgA或IgG第一抗体：冲洗后切片上组织滴加兔抗人IgA多克隆抗体或兔抗人IgG多克隆抗体，孵育，再用PBS冲洗；