[发明专利]一种多激素联合定量检测卡及其制备方法和使用方法

说明书

本发明公开了一种多激素联合定量检测卡及其制备方法和使用方法，包括底卡和面卡，所述底卡上设有：加样区，与加样区连接的多个结合区，通过时间阀与结合区一一对应连接的多个检测区；与检测区一一对应连接的废液区；所述结合区及检测区的底部均并联有微通道；所述微通道连接时间阀；所述面卡上设有加样孔和观察孔，加样孔的位置与底卡加样区对应，观察孔的位置与底卡检测区对应。本发明通过微流控技术控制待测样品的流速和流量，具有同一种标志物的多激素通过一条微通道进入检测区，避免相互干扰，从而减少误差，增加反应灵敏度；将待测样品制备成水包水微液滴，增大检测限度。

技术领域

本发明涉及微流控技术和免疫荧光微球免疫层析技术相结合的技术领域，具体涉及一种多激素联合定量检测卡及其制备方法和使用方法。

背景技术

睾酮作为性激素的一种，是临床激素六项检测种的重要组成部分。睾酮是广泛存在于人和动物体内的一种类固醇类激素，准确检测其在生物体内的含量，在判断其生殖性能、正常生理指数及病理浓度而用于疾病诊治、计划生育、动物繁育等方面都有重要的作用。男性体内睾酮由睾丸间质细胞产生，男性血清中睾酮含量是证实可疑睾丸功能紊乱，证明雄性激素缺乏以及检测睾酮代替治疗的最重要的检测数据。女性体内睾酮主要在卵巢中合成，也在肾上腺皮质内合成，女性血清中的睾酮含量用于确定女性雄性激素过多症。

雌二醇主要由卵巢或黄体分泌，一般在促卵泡激素和黄体生成素的作用下，经过卵泡膜细胞和颗粒细胞的协调作用合成得到雌二醇。雌二醇促使输卵管黏膜上皮细胞分泌活动增加和纤毛生长加快，促进受精卵经输卵管运行至子宫腔。当血清雌二醇水平下降时，受精卵经输卵管运行至子宫腔的时间延长，导致孕卵停留于输卵管的时间较长，从而增加了胚泡着床于输卵管的概率。

催乳素是由垂体和垂体外细胞产生的一种神经肽类蛋白激素，可表达于腺垂体的泌乳素细胞、蜕膜化的子宫内膜、卵巢组织、胸腺等，催乳素除参与乳汁合成并对生殖行为等发挥作用外，还具有潜在的免疫功能。催乳素在维持黄体与生长因子两方面的作用与生殖关系密切相关，提高子宫内膜容受性。催乳素及其受体对胚泡植入和妊娠维持是必要的，研究发现一定浓度的催乳素可促进子宫内膜细胞的生长和黏附，影响着床和胚胎发育。

微流控技术(Microfludics)是指在至少有一维为微米甚至纳米尺度的低维通道结构中控制体积为皮升至纳升的流体进行流动并传质、传热的技术。实现微流控的主要方法就是将流体限制在一个微米甚至纳米尺度的低维通道中，流体在微通道中具有独特的流体性质，如层流、液滴等等。当微通道在微米甚至纳米尺度时，微通道表面积与其内部体积比很大，通道的结构、形状和壁面性质都对流体的流动状态产生极大影响。因此，微流控可以实现一系列常规方法难以完成的微加工和微操作。时间阀的作用就是在固定的时间内控制通过微通道的流体的流速和流量，可以严格控制整个反应的时间并且控制进入检测区的流体的量。

荧光微球是指将荧光团通过包埋、共价键连接等方式引入有机或无机纳米粒子中，并让纳米粒子承担有机小分子荧光染料的检测、标记等功能，具有相对稳定的形态结构以及发光行为。荧光定量免疫层析技术，是免疫荧光技术和传统免疫层析技术相结合发展创新的一种定量新型检测技术。该技术在保留胶体金免疫层析技术操作简便、检测快速、便携性强的优点外，还通过荧光示踪增强技术实现了检测结果的精确定量。