[发明专利]一种循环肿瘤细胞分型定量检测卡及其制备方法和使用方法

权利要求书

1.一种循环肿瘤细胞分型定量检测卡，包括底卡和面卡，其特征在于，所述底卡上设有：加样区，与加样区连接的多个结合区，通过时间阀与结合区一一对应连接的多个检测区；所述结合区及检测区的底部均并联有微通道；所述微通道连接时间阀；

所述面卡上设有加样孔和观察孔，加样孔的位置与底卡加样区对应，观察孔的位置与底卡检测区对应。

2.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述结合区和检测区均为9个，结合区A、B、C、D、E、F、G、H、I分别喷涂有荧光微球A标记的抗EpCAM抗体、荧光微球B标记的抗CK18抗体、荧光微球C标记的抗EMA抗体、荧光微球D标记的抗N-cadherin抗体、荧光微球E标记的抗TAG12抗体、荧光微球F标记的抗SnaⅠ1抗体、荧光微球G标记的抗Survivin抗体、荧光微球H标记的抗Vimentin抗体、荧光微球I标记的抗Twist1抗体；检测区A、B、C、D、E、F、G、H、I分别包被有抗EpCAM抗体、抗CK18抗体、抗EMA抗体、抗N-cadherin抗体、抗TAG12抗体、抗SnaⅠ1抗体、抗Survivin抗体、抗Vimentin抗体、抗Twist1抗体。

3.根据权利要求1或2所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述加样区覆盖圆形滤纸；所述圆形滤纸直径为1.5-2.0cm、孔径为1-3μm。

4.根据权利要求1或2所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述微通道通过软光刻技术和微流控芯片技术制备，所述微通道孔径为10-15μm；所述时间阀孔径为8μm。

5.根据权利要求1或2所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述的底卡和面卡材质为PMA；所述底卡和面卡的背面扣合连接。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)底卡的制备：

(1-1)制图；

(1-2)掩模；

(1-3)光刻；

(1-4)再铸模；

(1-5)软光刻；

(2)在底卡的结合区分别喷涂荧光微球标记的抗体；

(3)在底卡的检测区分别包被抗体；

(4)在加样区覆盖滤纸；

(5)将所述底卡和面卡的背面扣合连接。

7.根据权利要求6所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括以下步骤：

(1-1)制图：微通道图形按照设计通过绘图软件绘制掩膜版图；

(1-2)掩模：制成掩膜版图后，打印在透明胶片上制得光刻掩膜板,利用此掩膜板通过光刻工艺制作硅片模具；

(1-3)光刻：在基片表面镀上一层阻挡层，再用甩胶机在阻挡层上均匀地甩上一层光敏材料-光刻胶；在光掩模上制备所需的通道图案；将光掩模复盖在基片上，用紫外光照射涂有光刻胶的基片，光刻胶发生光化学反应；用光刻胶配套显影液通过显影的化学方法除去经曝光的光刻胶；烘干后，利用未曝光的光刻胶的保护作用，采用化学腐蚀的方法在阻挡层上精确腐蚀出底片上平面二维图形，制成所需硅片模具；

(1-4)再铸模：通过将弹性材料涂于光刻形成的硅片模具表面，干燥后取下则硅片模具表面上图形转移到弹性材料上形成印模；

(1-5)软光刻：将PMA前聚体与固化剂按10:1比例混合，搅拌混匀后，置于真空箱内脱除气泡，然后在印模上浇注，PMA前聚体在印模上完全摊平后，将其连同印模一起放入烘箱内进行固化，置于80℃烘箱固化约48小时，之后将PMA基片从印模上剥离下来。