[发明专利]一种复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法

权利要求书

1.一种复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法，其特征在于包括以下几个步骤：（1）将桑叶烘干，粉碎过筛 ，

（2）在第（1）步预处理后的原料中，加入复合酶及乙醇水溶液、柠檬酸调整pH后放于摇床中，酶解活化后，用抽滤泵进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，收集的滤液即为桑叶粗提液，将收集的浸出液转入100mL容量瓶并用蒸馏水定容后，转入离心管后，离心得粗提离心液，最后取1mL粗提离心液于样品瓶中，通过高效液相色谱检测粗提液中绿原酸质量，

（3）先将第（2）步收集的浸出离心粗提液放置于在旋转蒸发器中，进行减压浓缩得桑叶浓缩液，然后用制备型高效液相色谱处理桑叶浓缩液进一步分离纯化，得到绿原酸馏分，最后将绿原酸馏分置于旋转蒸发器中，减压浓缩得绿原酸浓缩液，

（4）将第（3）步所得绿原酸浓缩液置于冰箱中冷冻后，转至真空冷冻干燥机中，干燥制得绿原酸固体单体产品，

根据权利要求1述复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法，其特征在于步骤（1）中烘箱温度可以为50～70℃，时间可以为4～6h，筛的目数可以为20～60。

2.根据权利要求1述复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法，其特征在于步骤（2）中原料的质量(g)∶复合酶的质量(g)∶乙醇(mL)∶水(mL)之比为1∶0.1～0.15∶3～12∶17～25的比例，柠檬酸调整pH为3.5～5.5，水浴温度可以为25～55℃，酶解活化时间是60～120min，离心机转速2000～4000r/min，离心时间10～20min。

3.根据权利要求1述复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法，其特征在于步骤（2）中流动相乙腈（mL）﹕水（mL）=10﹕90～50﹕50，温度20～40℃，进样量5～20μL，流速为0.6～1mL/min。

4.根据权利要求1述复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法，其特征在于步骤（2）中所述的酶为漆酶、纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶，所述的复配酶的质量比为漆酶∶纤维素酶∶半纤维素酶∶木瓜蛋白酶=0.5～2∶1.5∶10～15∶0.5～2。

5.根据权利要求1述复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法，其特征在于步骤（3）中旋转蒸发器的真空压强为0.4～0.6 Mpa、温度为80～100℃，制备色谱条件是，流动相甲醇（mL）﹕水（mL）=10﹕90～50﹕50，进样量8～16mL，流速为15～30mL/min。

6.根据权利要求1述复合酶催化活化桑叶提制高纯度绿原酸的方法，其特征在于步骤（4）中冷冻干燥时间可以为24～48h。