[发明专利]一株巨大芽孢杆菌P5-2及其分离方法和应用

说明书

本发明属于微生物应该领域，具体涉及一株巨大芽孢杆菌P5‑2及其分离方法和应用。该一株巨大芽孢杆菌P5‑2，于2019年1月7日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO.60536。本发明的巨大芽孢杆菌的生长速度快，脱氮效率高，环境适应能力强，对水产品无害，在贫营养条件下的氨氮去除率在60％以上，且不仅可以去除水中的氨氮也可以去除亚硝酸盐氮。本发明的巨大芽孢杆菌作为氮去除剂使用时，由于其对水产品无害，因此特别适合水产养殖水中去除氮。

技术领域

本发明属于微生物应该领域，具体涉及一株巨大芽孢杆菌P5-2及其分离方法和应用。

背景技术

微生物脱氮技术就是在人为控制下利用微生物将污水中的NO^3-还原为N₂清除废水中硝态氮的过程。如果废水中存在的含氮化合物是氨态氮，则先将氨态氮氧化为硝态氮即先进行硝化作用，然后再在厌氧条件下反硝化作用，进行脱氮，形成“硝化-反硝化”的脱氮过程与工艺。

而微生物脱氮法在实际应用中，因为是贫营养条件，因此所用菌株生长速度慢，脱氮效率较低，环境适应能力相对较弱。

发明内容

有鉴于此，本发明所要解决的技术问题，就是提出一株巨大芽孢杆菌P5-2，此外，本发明还提出了该微生物的分离方法和应用。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现：

一株巨大芽孢杆菌P5-2，于2019年1月7日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO.60536。

相对地，该一株巨大芽孢杆菌P5-2，其16S rRNA基因测序结果如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，巨大芽孢杆菌P5-2的生长条件为：25℃～40℃、pH5～9、盐度0～40‰，优选的最佳生长条件为：30℃，盐度为0或10‰，pH为7。

本发明的一株巨大芽孢杆菌P5-2的分离方法，包括如下步骤：

S1、取样

在罗非鱼工厂化循环水养殖车间，取养殖用水水样和生物填料共同置于4℃冰箱保存，备用于富集分离；

S2、初筛

在250ml锥形瓶中加入120mL的5号富集分离培养基，使用100mL量筒取20mL水样加入50mL的离心管中震荡约30s后放入5号富集分离固体培养基中(包含15个生物填料)，置于32℃，180r/min的摇床中恒温培养5～7d，重复以上操作两次，取第三次富集的培养液进行梯度稀释将其稀释至10^-3、10^-4、10^-5，取稀释液各150μL，涂布至5号富集分离固体培养基，每个稀释浓度各做2皿，置于32℃恒温培养箱中培养1～3d；使用接种环挑选单菌落，接种至5号富集分离固体培养基平板上进行纯化培养，经过多次划线纯化培养后获得纯种菌株；

S3、复筛

将上述获得纯种待测菌株分别接种于异养硝化培养基中，置于32℃，180r/min的恒温摇床中培养，24h后检测培养液中NH₄⁺-N，选择NH₄⁺-N含量最低的一株菌，即得巨大芽孢杆菌P5-2。

进一步地，所述的5号富集分离固体培养基包括如下含量的组分：0.7g/L的KNO₃、2.75g/L的葡萄糖、1.24g/L的KH₂PO₄·2H₂O、3.046g/L的K₂HPO₄·3H₂O、4g/L的NaCl，3mL的微量元素溶液以及15g/L的琼脂，该5号富集分离固体培养基的pH为7.5。