[发明专利]一种低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒和使用方法

说明书

一种血清低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒和检测方法,包括如下组分：含有能保护低密度脂蛋白胆固醇不参与胆固醇脂酶反应的聚阴离子和表面活性剂的R1试剂，和能够从上述遮蔽复合物中解离低密度脂蛋白所含有胆固醇的表面活性剂的试剂2以及标准品。

技术领域

本发明涉及临床检验领域，具体涉及一种低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒和使用方法。

背景技术

低密度脂蛋白(LDL)是富含胆固醇(CHO)的脂蛋白，是动脉粥样硬化的危险性因素之一，LDL经过化学修饰后，其中的apoB-100变性，通过清道夫受体(scavenger receptor)被吞噬细胞摄取，形成泡沫细胞并停留在血管壁内，导致大量CHO沉积，促使动脉壁形成动脉粥样硬化斑块(atheromatous plaque)，故LDL为致埃及粥样硬化的因子。临床上以 LDL-C的含量来反映LDL水平。低密度脂蛋白(LDL)是由极低密度脂蛋白 (VLDL)转变而来,它是转运肝内合成的内源性胆固醇的主要形式,含量过高,易导致动脉粥样硬化,故被认为是动脉粥样硬化的危险因子。

匀相法又称直接法,有多种方法,常见的有选择性遮蔽法、清除法等。选择性遮蔽法采用硫酸α-环糊精和镁离子等遮蔽CM和VLDL,用聚氧乙烯- 聚氧丙烯多聚醚遮蔽HDL,胆固醇酶试剂只作用于LDL-C产生显色物质。清除法先用一种表面活性剂使胆固醇酶试剂只作用于CM、VLDL、HDL 的胆固醇,但不显色,随后用另一种表面活性剂使胆固醇酶试剂作用于 LDL-C产生显色物质而被检测。直接法-保护性试剂法：在反应第一步， LDL在两性表面活性剂(保护剂)作用下被选择性保护，而非LDL脂蛋白(CM，VLDL-C，HDL-C)被胆固醇酶法试剂处理。第二步中，LDL中胆固醇被释放，在酶试剂与偶联剂作用下参与Trinder反应而显色，吸光度与标本中低密度脂蛋白胆固醇浓度成正比。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题而提供。

本发明通过以下技术方案实现：

检验原理：试剂1(RⅠ)中的聚阴离子与LDL形成稳定的复合物,表面活性剂Ⅰ使高密度脂蛋白(HDL)、乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL) 颗粒解离释放胆固醇(Cho),与胆固醇酶试剂反应,产生的过氧化氢(H2O2) 在缺乏偶联剂时被消耗而不显色,试剂2(RⅡ)中加入表面活性剂Ⅱ和色原, 使低密度脂蛋白(LDL)释放出胆固醇,参与Trinder反应,色泽深浅与 LDL-C量成比例。

其中聚阴离子为藻酸丙酯的硫酸酯钠盐和聚苯乙烯磺酸钠盐混合物，表面活性剂Ⅰ为N-(2-羟乙基)-N-(2-乙基己基)Β-丙氨酸单钠盐，表面活性剂Ⅱ为异构十醇聚氧乙烯醚。两种聚阴离子化合物配合使用，在检测低密度脂蛋白胆固醇时，采用优化浓度和比例的藻酸丙酯的硫酸酯钠盐和聚苯乙烯磺酸钠盐包裹LDL，优化后的比例为1：3-5，浓度分别为0.1％(w/v) 和0.3％-0.5％(w/v)；同时为了避免VLDL的共同被包裹，采用能掩蔽二价阳离子的金属螯合剂包括EDTA或EGTA等，其使用浓度为 0.1mM-2mM；对于表面活性剂Ⅰ的选用，可以是两性表面活性剂，优选为对低密度脂蛋白以外的脂蛋白有较好反应性的表面活性剂N-(2-羟乙基)-N-(2-乙基己基)Β-丙氨酸单钠盐等。对于表面活性剂Ⅱ的选用，优选为与低密度脂蛋白反应的表面活性剂异构十醇聚氧乙烯醚等。

胆固醇反应应用胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶进行，生成的过氧化氢在过氧化物酶作用下用4-氨基安替比林和高敏感度色原进行吸光度分析测定，并计算出低密度脂蛋白胆固醇的含量。作为商业上可得到的色原包括日本同仁化学的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-间苯甲胺(TOOS)、N- (2-羟基-3-磺丙基)-3，5-二甲氧基苯胺(HDAOS)、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’-琥珀酰基乙二胺(EMSE)等。作为这些色原的浓度，优选0.1mM-10mM。