[发明专利]一种多肽的液相合成方法

权利要求书

1.一种多肽的液相合成方法，其特征在于包括以下步骤：

a.Boc-Aib-His(Trt)-OMe的制备过程

将Boc-Aib-OH 2.03g，10mmol和H-His(Trt)-OMe·HCl 4.48g，10mmol溶于200mL有机溶剂乙酸乙酯中，加入缩合剂HOBt 1.485g，11mmol，EDC·HCl 2.108g，11mmol和4.076g，31.5mmol有机胺DIEA，30℃下反应3小时；反应结束后，将反应液倒入500mL分液漏斗，用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得.Boc-Aib-His(Trt)-OMe5.72g；

b.脱除Boc-Aib-His(Trt)-OMe的过程：

将5.72g Boc-Aib-His(Trt)-OMe溶于100mL乙腈溶液中，加入3M的NaOH溶液300mL，室温下搅拌30min，倒入500mL的分液漏斗中将碱水相分离，用饱和食盐水洗涤3遍后再用0.5％的HCl溶液洗涤一遍，干燥旋干得Boc-Aib-His(Trt)-OH 5.275g；

c.Z-D-Nal-D-Phe-OMe的制备过程：

将Z-D-Nal-OH 0.699g，2mmoL与H-D-Phe-OMe·HCl 0.517g，2.4mmoL溶于乙酸乙酯30mL中，加入缩合试剂HOBt 0.324g，2.4mmoL，EDC·HCL 0.46g，2.4mmoL和有机碱DIEA0.646g，2.5mmoL，30℃下反应2.5小时，反应结束后倒入150mL分液漏斗，用5％的HCL溶液洗去多余的H-Phe-OMe，而后用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得.Z-D-Nal-D-Phe-OMe 0.99g；

d.将Z-D-Nal-D-Phe-OMe0.99g溶于50mL乙酸乙酯中，加入10％的钯碳0.47g，氢气氛围下反应3小时，抽滤除去钯碳，浓缩旋干得H-D-Nal-D-Phe-OMe 0.74g；

e.Boc-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-OMe的制备过程

将0.74g H-D-Nal-D-Phe-OMe 1.97mmoL与1.15g Boc-Aib-His(Trt)-OH溶于100mL乙酸乙酯中，加入缩合试剂HOBt 0.319g，2.364mmoL，EDC·HCl 0.453g，2.364mmoL，30℃反应3小时，反应完全后倒入250mL分液漏斗中，用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得Boc-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-OMe 1.752g；

f.Boc-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-OH的制备过程

将1.752g Boc-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-OMe 1.86mmoL加入100mL乙腈溶液中，再加入3M的NaOH溶液300mL，室温下搅拌30min，倒入500mL的分液漏斗中将碱水相分离，用饱和食盐水洗涤3遍后再用0.5％的HCl溶液洗涤一遍，干燥旋干得Boc-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-OH 1.6g；

g.将Z-Lys(Boc)-OH 0.76g，2mmoL溶于40mL四氢呋喃中，加入0.84g 25％的氨水6mmoL，缩合试剂EDC·HCL 0.458，2.4mmoL，HOBt 0.324，2.4mmoL室温下反应3小时，反应结束后先旋干四氢呋喃，加入50mL的乙酸乙酯溶解，用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得Z-Lys-(Boc)-NH₂ 0.64g；

f.H-Lys-(Boc)-NH₂的制备过程

将Z-Lys-(Boc)-NH₂ 0.64g，1.68mmoL溶于50mL乙酸乙酯中，加入10％的钯碳212.8mg，氢气氛围下反应3小时，抽滤除去钯碳，浓缩旋干得H-Lys-(Boc)-NH₂ 0.58g；

g.Boc-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-Lys(Boc)-NH₂五肽的制备过程

将H-Lys-(Boc)-NH₂ 418mg，1.7mmoL与Boc-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-OH 1.576g，1.7mmoL加入100mL乙酸乙酯中，加入缩合试剂HOBt 275mg，2.04mmoL，EDC·HCl 391mg，2.04mmoL，30℃反应3小时，反应完全后倒入250mL分液漏斗，用5％的碳酸钾溶液洗涤3遍，饱和氯化钠洗涤2遍，干燥旋干后得Boc-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-Lys(Boc)-NH₂五肽1.8g；

h.全保护五肽Boc-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-Lys(Boc)-NH₂的脱除保护基

将0.75mL的三异丙基硅烷，0.75mL水加入到28.5mL的三氟乙酸中，搅拌均匀后倒入盛有1.8g全保护五肽Boc-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-Lys(Boc)-NH₂的容器内，室温下反应2小时，而后将反应溶液缓慢倒入甲基叔丁基醚：正己烷＝5：1的混合溶液200mL中，滤去溶液，继续用此比例混合液洗涤3遍，抽干得白色五肽H-Aib-His-D-Nal-D-Phe-Lys-NH₂固体1.3g，再用高效液相色谱进行纯化，得99％纯的五肽H-Aib-His-D-Nal-D-Phe-Lys-NH₂300mg。