[发明专利]一种促进百子莲体胚萌发同步化率的方法

说明书

本发明公开了一种促进百子莲体胚萌发同步化率的方法；包括取小花梗外植体诱导出愈伤组织；通过继代培养诱导出胚性愈伤组织；胚性愈伤组织置于成熟胚诱导培养基中经2～6℃处理2～4d后，在不同糖配比作为碳源，多效唑作为生长调节物质的条件下，培养诱导出成熟胚胎并萌发为种苗。本发明诱导方法中，1g胚性细胞诱导成熟胚的数量达958.64个，同步化率为87.63％。本发明技术处理简单，操作性强，有效改善了胚性细胞的长期继代过程所造成的体胚数量较少，同步化率较低的问题，同时减少了畸形胚的发生。

技术领域

本发明属于百子莲快繁技术领域，具体涉及一种促进百子莲体胚萌发同步化率的方法。

背景技术

百子莲‘Big Blue’(Agapanthus praecox ssp.orientalis‘Big Blue’)又名“蓝百合”、“非洲百合”，原产非洲南部，为单子叶多年生草本花卉，具有较强的观赏性。近半个世纪以来，百子莲在国际花卉业发展中脱颖而出，成为风靡全球的鲜切花、盆栽及地被花卉，并体现出极佳的观赏价值。此外，百子莲抗性极强，夏季可抗40℃以上的高温，冬季也可耐-10℃以下的低温，对土壤要求不严，且极少有病虫害发生，该物种在道路绿化、土壤修复领域也具有巨大的发展空间，目前市场上种苗供不应求。

百子莲在原产地南非常用种子或分株繁殖，但引种国内后存在发芽率低，繁殖周期长，繁殖系数低及后代易分化等缺点。体细胞胚胎发生途径具有数量多、繁殖快、结构完整、植株再生率高以及不受季节影响等特点，因此被认为是百子莲无性扩繁和种质保存的较佳途径。

国内百子莲进行体胚诱导的一般流程为：选择小花梗诱导出愈伤组织，通过继代培养诱导出胚性细胞，进而将培养基中的生长素去除继续培养胚性细胞，以利于诱导成熟胚胎并萌发为种苗。

该体系进行快繁的核心在于：利用植物体细胞全能性发育成完整的植株，而体细胞的载体—胚性细胞，可以通过不断继代培养得以扩增。但初期发生的胚性细胞多为单细胞起源，且数量较少，因此，为了维持胚性细胞的数量，通常在胚性细胞阶段进行多次继代培养。而频繁继代会导致材料的同步化程度降低，畸形胚频发，最终严重削弱了体胚发生体系的高效性，导致体胚苗数量的减少。

为减少频繁继代培养造成的体胚数量减少，以及工作量增加的问题，相关研究人员做了胚性细胞的超低温保存研究，旨在减少继代频次，同时能够很好维持胚性愈伤组织的胚性，从而利于后期的体胚苗诱导。但超低温保存技术要求相对较高，同时也会导致材料损失。因此，在百子莲胚性愈伤组织继代增殖的过程中，通过调控体胚发生过程，增加胚性细胞数量，以及调控体胚萌发质量是解决体胚萌发及成苗数量减少的有效途径。

相对于常规的组织培养，体细胞胚胎发生途径相对较困难，许多机理不详。而百子莲以往的研究中，通常利用胚性细胞进行继代保存，并以此为平台进行基因转化、基因功能研究、胚性丧失以及超低温保存等领域的研究，而对体胚发生途径的优化相关的报道和研究较少，尤其是促进体胚萌发同步化相关研究并未见报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术存在的不足，提供一种促进百子莲体胚萌发同步化率的方法。本发明通过调控体胚萌发过程中的同步化，以获得数量更多、发育阶段一致的体细胞幼苗，更大限度地发挥百子莲体胚体系在种苗快繁领域的优越性。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明涉及一种促进百子莲体胚萌发同步化率的方法，所述方法包括如下步骤：

S1、取小花梗外植体诱导出愈伤组织；

S2、通过继代培养诱导出胚性愈伤组织；

S3、胚性愈伤组织置于成熟胚诱导培养基中经2～6℃处理2～4d后，培养诱导出成熟胚胎并萌发为种苗。