[发明专利]MAGI-1错义突变(P.W845R)在肾足细胞功能中的应用

说明书

本申请涉及MAGI‑1错义突变(P.W845R)在肾足细胞功能中的应用。本申请涉及MAGI1 siRNA介入对MAGI1表达、肾足细胞功能的影响，包括细胞活力、细胞凋亡率、细胞粘附能力、细胞伸展能力等多个方面。MAGI1 siRNA介入诱导的肾足细胞凋亡模型具有良好的细胞模型条件，为深入研究肾相关病症和抗肾足细胞凋亡的药物奠定实验基础。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及MAGI-1错义突变(P.W845R)及相关siRNA在肾足细胞功能中的应用，以及构建MAGI-1突变的肾足细胞凋亡模型。

背景技术

肾脏是人体最重要的器官之一，主要生理功能是通过生成尿液清除体内代谢产物、以及进入机体的过剩物质和毒物等，同时经过重吸收功能保留水分和其它有用物质，以实现对体液、电解质和酸碱平衡的调节，维持机体内环境的稳定。

肾脏足细胞，即肾小囊脏层上皮细胞，是维持肾小球滤过屏障正常结构和功能的重要成分，在维持肾小球通透性，对抗毛细血管腔内流体静水压方面发挥着重要作用。高血压、糖尿病、肾毒性药物、原发性肾小球肾炎、肿瘤等多种因素都可能导致肾脏足细胞的损伤。由于足细胞是高度分化的终末细胞，一旦缺失几乎不可再生。足细胞进行性的损伤丢失，导致肾小球滤过膜的完整性遭到破坏，形成蛋白尿，而蛋白尿的出现又进一步加重足细胞的损伤。由此形成的恶性循环会最终导致肾小球硬化的产生，影响肾脏功能，引发慢性肾脏疾病(chronic kidney disease，CKD)。

随着CKD病情进展，患者的肾功能将进一步下降进而发展为慢性肾衰竭，最终进入终末期肾脏病(end stage renal disease，ESRD)，给家庭和社会带来沉重的负担。通过对47204名中国成年人进行横断面研究，其中CKD患者约占10.8％，相当于全国有1.2亿左右成年人患有不同程度的CKD。临床上针对上述发病机制采取各种可能的治疗方法，包括控制血压、血糖、血脂，药物干预抑制炎症、调节免疫、严格控制蛋白摄入、减少蛋白尿等，尽可能的延缓肾脏疾病的进展。但是由于治疗反应性不一，部分病人病情持续进展，肾功能的进行性下降，最终导致终末期肾病。

近年来，国内外文献已有报道肾病动物模型。随着技术方法的不断改进，所诱导的肾病模型日趋成熟，不论在动物还是细胞水平能够较好地模拟人慢性肾病模型。但是，至今尚没有对MAGI-1突变诱导肾足细胞凋亡模型较为系统详尽的报道。因此，本发明主要通过MAGI-1错义突变(P.W845R)对肾足细胞活性、蛋白表达、凋亡率、细胞形态等方面的影响，来探讨MAGI-1错义突变(P.W845R)在肾足细胞功能中的应用，为深入研究肾相关病症和抗肾足细胞凋亡的药物奠定实验基础。

发明内容

本发明提供了一种siRNA，其正义链的核苷酸序列选自SEQ ID NO：1、3、5、7，其反义链的核苷酸序列选自SEQ ID NO：2、4、6、8。

本发明提供了一种siRNA，其正义链和反义链的核苷酸序列选自如下的组：SEQ IDNO：1和2、SEQ ID NO：3和4、SEQ ID NO：5和6、SEQ ID NO：7和8。

在一个方面中，所述siRNA的正义链和反义链的核苷酸序列选自SEQ ID NO：5和6。

本发明提供了一种载体，其包含所述的siRNA。

在一个方面中，所述载体选自质粒、脂质体、病毒或其它合适类型的载体；优选的，所述质粒选自真核细胞质粒；所述脂质体选自lipofectamin；所述病毒选自慢病毒或逆转录病毒。

本发明提供了一种细胞模型，其包含所述的siRNA，或所述的载体。

在一个方面中，所述细胞选自肾足细胞；优选的，所述细胞选自人肾足细胞或鼠肾足细胞；更优选的，所述细胞选自MPC5细胞。

本发明提供了一种细胞模型的制备方法，其包括：将所述的siRNA，或所述的载体，导入宿主细胞中。